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深圳市科潤達生物工程有限公司
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高遷移率族蛋白(HMGB1)的檢測意義

時間:2018/8/10閱讀:2978
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檢測原理

劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被小鼠高遷移率族蛋白B1(HMGB1)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠高遷移率族蛋白B1(HMGB1)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法

1.  血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

3.  細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

5.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

1.       酶標儀(450nm)

2.       高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.       37恒溫箱

操作注意事項

1.  試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正常現象,水浴加熱使結晶*溶解后再使用。

2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

3.  標準品稀釋液即可視為陰性對照或者空白;預處理后的樣本無需稀釋,直接取10μL加樣即可。

4.  嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成

名稱

96孔配置

48孔配置

備注

微孔酶標板

12孔×8條

12孔×4條

標準品(16ng/mL)

0.6mL

0.6mL

按說明書進行稀釋

標準品稀釋液

6mL

3mL

樣本稀釋液

6mL

3mL

檢測抗體-HRP

10mL

5mL

20×洗滌緩沖液

25mL

15mL

按說明書進行稀釋

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止液

6mL

3mL

封板膜

2張

2張

說明書

1份

1份

自封袋

1個

1個

注:標準品用標準品稀釋液依次稀釋為:16、8、4、2、1、0.5 ng/mL..

試劑的準備

 20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

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