2. 將混合氣瓶、氮氣瓶安放平穩，并分別裝好減壓閥（含壓力表），安置在適當位置；
3. 接上氣路并檢查氣路，為防止漏氣，必要時可在各接管處用密封膠粘合；
使用
（一）操作室厭氧環境形成：
1. 按使用要求放置好必要的附件和器具，并向操作室內放入二個無毒塑料袋；
2. 通電源開照明燈，開溫控儀，調節所需溫度及安全溫度；
3. 操作室內放入1000g鈀粒（封閉）和500g干燥劑，并放入美蘭指示劑（封閉）；
4. 關緊取樣室內外門，并抽真空校驗；
5. 操作室內*次置換（氮氣置換）：
A. 先用橡皮管插入操作室內進氣口，另一頭插入塑料袋；
B. 接通氮氣進氣路，打開氮氣控制閥1，使二只塑料袋充足氮氣，關閉閥門1，然后扎緊袋口；
C. 把乳膠手套套在觀察板法蘭圈上并扎緊；
D. 把塑料袋內氮氣漸漸放于操作室內，至全部放出。
6. 操作室第二次置換（氮氣置換）重復一次充氮過程，取樣室先抽真空，并注意隨時用腳踏開關開閉排氣。
7. 操作室第三次置換（混合氣體置換）：（混合氣體配比為N2 85%、H2 10%、CO2 5%）
A. 調換氣路打開混合氣閥3進氣，充氣時取樣室先抽真空，并隨時用腳踏開關開閉排氣；
B. 混合氣充滿塑料袋后，關掉混合氣閥并打開閥5，使混合氣經過流量計，調整流量計，流量為每分鐘10ml左右；
C. 把塑料袋內混合氣漸漸排于操作室內；
D. 通過三次換氣后，操作室內氣體含氧量已處于極微量狀態。
8. 操作室內打開粑粒除氧劑，接通除氧催化器電源進行催化除氧，一小時后開美蘭指示劑（美蘭安瓶）觀察其變色情況，不變色為操作室內達到厭氧環境；
9. 開紫外線滅菌燈，室內進行滅菌處理，滅菌時間按具體實驗自定。
（二）菌種的置入和培養：
1. 檢查取樣室內門并關緊之；
2. 打開取樣室外門，將菌種放入取樣室后即關上外門；
3. 取樣室充氮置換三次過程：打開真空泵，先抽真空度500ml汞柱（66kPa）以上停，然后人工打開氮氣閥2進氣，使指針回復零位，關掉閥2。第二次重復操作一次。第三次操作時，使真空度500ml汞柱（66kPa）以上停，然后打開閥4進混合氣，使指針回復零位，后掉閥4。取樣室充氮置換三次過程結束；
4. 如選定真空度較低就需要增加置換的次數；
5. 取樣室內外門開啟、關緊，再抽低真空度100ml汞柱（13kPa）檢驗；
6. 厭氧培養箱需要長期連續使用的條件：
A. 每天在操作室內打開美蘭指示劑觀察，如不正常就必須重新換氣；
B. 要長期連續輸入微量的混合氣體，使補進的氮氣能和微量的氧結合通過催化吸收，保證室內厭氧狀態，補入混合氣流量選定為每分鐘10ml左右；
C. 連續培養運行一天，更換一次除氧劑和干燥劑。
7. 操作室內培養室內室溫度可任意選擇和控制。
8. 混合氣瓶、氮氣瓶輸出壓力調整：調節減壓閥，使輸出壓力0.1Mpa左右。
注意事項
1. 儀器盡可能地安裝于空氣清凈、溫度變化較小的地方；
2. 開機前應全面熟悉和了解各組成配套儀器、儀表的使用說明，掌握正確使用方法；
3. 培養物放入必須是在操作室內達到厭氧環境后放入；
4. 如發生故障（停氣等原因）操作室內仍可保持12小時厭氧狀態（超過12小時則根據需要把培養物取出另作處理）；
5. 經常注意氣路有無漏氣現象；
6. 調換氣瓶時，注意要扎緊氣管，避免流入含氧氣體；
7. 真空泵按要求使用，定期檢查加油。
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