ABC-ELISA材料和方法

時間：2011/9/27閱讀：1228

BAS酶聯免疫吸附試驗材料和方法

（以篩選抗空腸彎曲菌共同抗原的單克隆抗體為例）

1 材料

（1）空腸彎曲菌共同抗原提取物，自制。

（2）生物素化羊抗鼠IgG（BSAMG），衛生部上海生物制品所。

（3） ABC試劑，衛生部上海生物制品所。如ABC試劑需自己配制，可按說明要求，將親和素與酶標生物素按一定比例混合，置37℃孵育30min后使用。

（4）被檢雜交瘤培養物上清液。

（5）其他試劑及器材同常規ELISA法。

2 方法ABCELISA間接法程序

（1）用包被液對空腸彎曲菌共同抗原提取物作適當稀釋（1∶16），加入反應孔中，每孔01ml，置4℃包被過夜或37℃1～2h。

（2）用洗滌液洗滌2次，每次1min，瀝干。

（3）加入雜交瘤培養物上清液，每孔01ml。同時作BALB/C小鼠免疫血清（陽性）及正常血清和培養液（陰性）對照，置37℃1～2h。

（4）洗滌3次，方法同上。

（5）用保溫液對生物素化羊抗鼠IgG作適當稀釋（1∶400～1∶1000），加入反應孔中，每孔01ml。置37℃孵育1h。

（6）洗滌3次，方法同上。

（7）用ABC稀釋液或保溫液對ABC試劑作適當稀釋（1∶100），加入反應孔中，每孔01ml。置37℃孵育30min。

（8）洗滌3次，方法同上。

（9）加入鄰苯二胺底物溶液，每孔01ml，置暗盒內室溫顯色適當時間（30min）。

（10）加入2mol/L H2SO4，每孔005ml，終止反應。用酶聯檢測儀檢測結果，并記錄其OD值。

3 結果判定以P/N≥2為陽性，或根據自定標準判定。

4 注意事項

1 ABCELISA中各要素的*反應條件需經篩選后確定，不能照搬常規ELISA的反應條件。

2 ABCELISA對抗原和抗體（或免疫血清）的質量要求高，否則可造成較高的本底或背景顯色。

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