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研域(上海)化學試劑有限公司
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現貨人胰島素樣生長因子結合蛋白的說明書

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人胰島素樣生長因子結合蛋白

用 途:
    人IGFBP-1 ELISA試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、緩沖液中細胞上清液及各種體液中的IGFBP-1 。本試劑盒可以檢測天然和重組的IGFBP-1 。本試劑盒于科研、而非用于臨床診斷。
    
試驗原理:
    人IGFBP-1 試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知IGFBP-1 濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將IGFBP-1 和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中IGFBP-1 的濃度呈比例關系。

自備材料
蒸餾水。
加樣器:5ul、10 ul、50 ul、100 ul、200、500 u、1000lul。
振蕩器及磁力攪拌器等。

人胰島素樣生長因子結合蛋白

安全性

避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。


操作注意事項
試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

人胰島素樣生長因子結合蛋白

樣品收集、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

人胰島素樣生長因子結合蛋白

操作步驟
使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。
加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。

人胰島素樣生長因子結合蛋白

結果分析
以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的IGFBP-1 標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的IGFBP-1 含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

局限
6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到的結果。

試劑盒性能
靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
特異性:不與人其它細胞因子反應。
重復性:板內、板間變異系數均小于10%。

E.coli O139(Escherichia coli O139) 抗志賀毒素大腸桿菌O139抗體(仔豬水腫病志賀毒素大腸桿菌O139) 0.2ml
E.coli O139(Escherichia coli O139) 抗志賀毒素大腸桿菌O139抗體(仔豬水腫病志賀毒素大腸桿菌O139) 1.0ml
EP3(Prostaglandin E receptor 3) 前列腺素E受體3抗體 0.2ml
EphA1 R(Ephrin A1 Receptor) 抗EphA1-R受體抗體 0.2ml
EphA2 R(Ephrin A2 Receptor) 兔抗酪氨酸蛋白激酶A2受體抗體 0.1ml
Phospho-EGFR(Tyr1086)  磷酸化表皮生長因子受體抗體 0.1ml
EphA4(Eph-related receptor tyrosine kinase ligand 7) 抗酪氨酸蛋白激酶A5抗體 0.2ml
EphA2 R(Ephrin A2 Receptor) 兔抗酪氨酸蛋白激酶A2受體抗體 0.2ml
EphA4 R(Ephrin A4 Receptor 酪氨酸蛋白激酶A4受體抗體 0.2ml
EphB2 R/Eph receptor B2 (Ephrin type B receptor 2) Eph receptor B2 抗體 0.1ml
EphB2 R/Eph receptor B2 (Ephrin type B receptor 2) Eph receptor B2 抗體 0.2ml
Phospho-Estrogen Receptor alpha (Tyr537)  磷酸化雌激素受體α抗體 0.1ml
EPOR 紅細胞生成素受體抗體 0.1ml
 

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