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研域(上海)化學(xué)試劑有限公司
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人聚腺苷酸二磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶-1(PARP-1)說明書

時間:2010-8-14閱讀:474
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人聚腺苷酸二磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶-1PARP-1 

本試劑盒僅供研究使用      標(biāo)本:血清或者血漿

 

一、試 劑 組 成

精密度微孔板96

Microtitration Strips

1

28℃干燥保存

酶標(biāo)偶合液

Conjugate   

1 12.0毫升

28℃冷藏保存

標(biāo)準(zhǔn)品

Standard

5瓶 各1.0毫升

28℃冷藏保存

呈色劑A

Substrate A

1 6.0毫升

28℃避光冷藏保存

呈色劑B

Substrate B

1 6.0毫升

28℃避光冷藏保存

終止液

Stopping Solution

1 6.0毫升

室溫保存

20倍濃縮洗滌液

Rinsing Buffer x 20

1 60.0毫升

28℃冷藏保存

5倍濃縮樣品稀釋液

Diluent x 5

1 15.0ml

28℃冷藏保存

英文說明書,中文說明書

 

各一份

室溫保存

 

二、注意事項

1.  此試劑為體外檢測試劑,效期內(nèi)使用,試劑應(yīng)視為傳染物,不同總批號的試劑不能混用。

2.  使用前應(yīng)將盒內(nèi)各試劑取出。室溫放置至少30分鐘,

3.  濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶后,請于37℃孵育15分鐘。

4.  濃縮樣品稀釋液出現(xiàn)結(jié)晶后,請于37℃孵育15分鐘

5.  24小時內(nèi)進(jìn)行實驗,標(biāo)本可存放于28℃。不需及時實驗,標(biāo)本-20℃保存,避免反復(fù)凍融。

6.  在反復(fù)清洗微孔板,并扣干微孔中的殘余液體,否則將降低度,造成吸光度偏離的假像。

7.  加樣完畢后,應(yīng)注意輕微搖動微孔反應(yīng)條,以便使孔中的液體充分混勻。

8.  試劑盒保存于28℃,請勿冷凍,有效期請見盒內(nèi)標(biāo)示。

 

三、實驗前準(zhǔn)備

1使用前應(yīng)將盒內(nèi)各試劑取出,室溫放置至少30分鐘。

2.準(zhǔn)備各種實驗儀器及材料,如微量移液器,吸頭,醫(yī)用蒸餾水等

3濃縮洗液與醫(yī)用蒸餾水119倍稀釋后成為應(yīng)用洗滌液

4濃縮樣品稀釋液與醫(yī)用蒸餾水14倍稀釋成應(yīng)用樣品稀釋液

5.用應(yīng)用樣品稀釋液來稀釋樣品,按照1100的體積比來稀釋樣品如10μl的樣品加入到1ml的應(yīng)用樣品稀釋液中,充分混勻待用。)

 

四、操 作 步 驟

1.取出酶標(biāo)板,設(shè)空白孔,依照次序?qū)?yīng)分別加入100μl的標(biāo)準(zhǔn)品于空白微孔中(空白孔視為0號標(biāo)準(zhǔn)品,用醫(yī)用蒸餾水替代

2、分別標(biāo)記樣品編號,加入100μl的稀釋樣品于空白微孔中(不同的樣本采用不同的吸頭)。

3、將酶標(biāo)板置于37溫育30分鐘;

4、將酶標(biāo)板板取出,將其中的液體甩去,每個孔中全部加滿應(yīng)用洗滌液后,立即甩去液體;

5、每個孔中加滿應(yīng)用洗滌液后,輕微振搖酶標(biāo)板30秒后將孔中的應(yīng)用洗滌液甩去,在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干。

6、重復(fù)第5個步驟5次,在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干。

7、在標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣品孔中加入100μl的酶標(biāo)偶合溶液。

8、將96孔板置于37溫育30分鐘。

9、將酶標(biāo)板取出,將其中的液體甩去,每個孔中全部加滿應(yīng)用洗滌液后,立即甩去液體。

10、每個孔中再次加滿洗滌應(yīng)用液后,室溫輕微振搖酶標(biāo)板30秒后將孔中的應(yīng)用洗滌液甩去,在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干。

11、重復(fù)第5個步驟5次,在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干。

12、在每個孔中加入底物A 50μl后立即加入底物B 50μl。輕輕振蕩混勻。A液、B液采用不同的吸頭加樣)

13、將酶標(biāo)板置于37避光溫育反應(yīng)15分鐘。

14、每個微孔中加入50μl的終止液,輕輕振蕩混勻

15、在酶標(biāo)儀上,450nm處測定OD; 顯色后,15分鐘內(nèi)進(jìn)行測定。

16、根據(jù)制備的標(biāo)準(zhǔn)曲線,計算樣本含量

 

五、結(jié) 果 判 斷

1. 儀器值:于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值;

2、檢測值范圍:0400nmol/L

3、敏感度:1.0nmol/L

 

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