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研域(上海)化學試劑有限公司
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快速細胞分析儀應用簡介

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細胞計數(shù)一直是令大家頭疼的事,傳統(tǒng)的細胞計數(shù)不但麻煩,而且還沒有辦法判斷細胞的活率、細胞的體積、細胞的的直徑、細胞的濃度、以及細胞碎片等諸多問題。
 
傳統(tǒng)的細胞計數(shù)方法就是一臺細胞計數(shù)器(hemacytometer)和一部顯微鏡,為了得到準確的計數(shù),血細胞計數(shù)器必須首先用擦鏡紙*的進行清潔,然后用將要進行計數(shù)的細胞填滿血細胞計數(shù)器,過程必須十分小心,這樣才能保證細胞稀釋的合適濃度和細胞沒有聚集的現(xiàn)象,接著你得用顯微鏡按照血細胞計數(shù)器上的小柵格進行計數(shù),為了準確起見,你不停的計數(shù)直到你數(shù)了至少100個細胞為止。
 
目前使用比較常用的方法是:首先取來樣品細胞用臺盼藍染色,然后通過CDC成像,細胞在CDC成像后通過軟件來計算細胞的個數(shù)和細胞的活率,但是這種做法卻存在一下缺點:
 
一是臺盼藍對細胞有毒害作用,對部分已損傷的細胞會致死,活性測量的結果會有所偏差;
 
二是對于細胞聚集的團塊無法用染色來分辨計數(shù)。
 
三是檢測結果重復性差
 
我現(xiàn)在給大家介紹一種新的方法:
把樣品細胞懸浮在(一種等電壓的電解質(zhì)溶液)中,在通過一根毛細管測量通道時,被頻率為1MHz的電脈沖掃描檢測細胞,由于死細胞的膜是破裂不完整的,胞內(nèi)的細胞質(zhì)同膜外的等滲透緩沖液有相同的電導率,因此電脈沖信號能夠穿過膜直接檢測到細胞核的大小,而活細胞擁有完整的細胞膜,電脈沖信號無法透過,測到的是全細胞的體積,每個細胞或團塊經(jīng)過測量孔時都會產(chǎn)生一個信號,信號次數(shù)就是細胞的數(shù)目,信號的大小也與細胞的大小呈一定比例,利用兩者體積上的差異,就能夠區(qū)分死活細胞
 
功能:細胞計數(shù)、細胞死活判斷、細胞體積檢測、細胞團校正.
包括:     細胞碎片數(shù)   細胞活率  細胞團校正系數(shù)                
            活細胞數(shù) / 活細胞濃度
            死細胞數(shù) / 死細胞濃度      
            總細胞數(shù) / 總細胞濃度
            細胞直徑 / 平均直徑        
            細胞總體積 / 平均體積/典型體積
 
適用范圍:
 
包括所有的哺乳動物細胞(包括腫瘤細胞, 血細胞, 原代培養(yǎng)細胞及各種細胞系),藻類,細菌,精子細胞,寄生蟲,浮游生物等.
 
應用領域:
 
藥理毒理分析 / 腫瘤研究 / 混合細胞(干細胞)樣本分析;
組織工程 / 發(fā)酵監(jiān)控 / 病毒感染復數(shù)(MOI)分析 / 細胞質(zhì)量控制;
細胞培養(yǎng)條件的優(yōu)化 / 環(huán)境毒理與檢測 / 海洋生物和藻類研究
細菌及顆粒的計數(shù) / 細胞結團情況評估等
 
胞膜完整性區(qū)分法

這與傳統(tǒng)的臺盼藍染色法有著很大程度的不同。傳統(tǒng)的臺盼藍染色有三大缺點和不足:
一是臺盼藍對細胞有毒害作用,對部分已損傷的細胞會致死,活性測量的結果會有所偏差;
二是對于細胞聚集的團塊無法用染色來分辨計數(shù)。
三是檢測結果重復性差。
胞膜完整性技術無須使用染色,而是利用細胞膜的完整性來測定。死細胞具有一個可滲透的細胞膜,它允許等滲緩溶液CASYt-on進入。因此,死細胞內(nèi)的細胞質(zhì)同胞外的等滲緩沖液具有相同的電導率,可以被電極所忽略,所測得的僅僅是緊密結構的細胞核的體積。而活細胞擁有完整的細胞膜,胞膜完整性技術分析的是全細胞的體積。利用兩者的相對差異即可區(qū)分開來。
 
電子脈沖分析技術

它和傳統(tǒng)的CCD成像技術有很大的不同。CCD成像技術質(zhì)量不高,而且是從靜態(tài)獲取信息,因此有偏差。而電子脈沖分析技術使用的是動態(tài)的電子脈沖分析技術從來獲取信息。當懸浮于電解質(zhì)溶液中的細胞通過一個的測量孔抽提時,在這片低壓區(qū)域中被每秒1百萬次頻率的電子脈沖掃描,同時可對每個細胞作大小,重量厚度及時間的分析。這些信號將在一個有512000個通道的多孔徑分析器中分離和積累,zui后*的結果由芯片計算技術即時性的完成
 
進步與優(yōu)勢:

1. 電子背景信號通過電子脈沖分析域而被過濾。因此,它是在無背景條件下工作的,即使細胞含量小于100個/ml也能被準確的測量。
 
2. 即使在高活性區(qū)間80%--100%也能進行*的辨認,而不會出現(xiàn)錯誤的陽性結果。

3. 絕大多數(shù)染色法都會傷害細胞,引起結果的偏差。*的方法可免除這種結果,得到真實的細胞情況。
 

4. 不必擔心樣品的濃度過高而影響測量。當高濃度超過允許的極限值時,系統(tǒng)會發(fā)出警告信息,通過調(diào)整測量的毛細管而改變極限值,然后通過稀釋調(diào)節(jié)濃度而測量。

5. 對于棘手的細胞團問題,通過一個細胞團校正器,它的無限制測量范圍,能在多點測量尺度耦合,使得小細胞團和大細胞團體積都可以測得

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