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研域(上海)化學(xué)試劑有限公司
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大鼠胰島素(INS)Elisa試劑盒說明書

時(shí)間:2013-8-28閱讀:615
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大鼠胰島素(INS)Elisa試劑盒說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍: 96T
0 mU/L -20 mU/L
使用目的:
本試劑盒用于測定大鼠血清樣本中胰島素(INS)含量。
實(shí)驗(yàn)原理
大鼠胰島素(INS)Elisa試劑盒 說明書本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠胰島素(INS)水平。用純化的大鼠胰島素
(INS)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入胰島素(INS),再與HRP
標(biāo)記的胰島素(INS)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB
顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深
淺和樣品中的胰島素(INS)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過
標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠胰島素(INS)濃度。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品(40 mU/L) 0.5ml×1 瓶
3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個(gè)
標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
釋。
20 mU/L 5 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10 mU/L 4 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
5 mU/L 3 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2.5 mU/L 2 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.25 mU/L 1 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、
待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,
然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡
量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此
重復(fù)5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn))。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止
液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
操作程序總結(jié):
計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD 值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的
OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計(jì)算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD 值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),
即為樣品的實(shí)際濃度。
注意事項(xiàng)
1. 大鼠胰島素(INS)Elisa試劑盒 從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未
用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間
控制在5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD 值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計(jì)
算時(shí)請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 個(gè)月大鼠胰島素(INS)Elisa試劑盒說明書

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