ELISA試劑盒的影響因素應選用質量靠得住的產品，不能圖便宜，忽視質量保證。生物試劑應妥善保存于4℃冰箱內，在使用時先平衡至室溫，不同批號的試劑組分不宜交叉使用。試劑開啟后要在一周內用完，剩余的試劑下次用時應先檢查是否變質，顯色劑如被污染變色將造成全部顯色，導致錯誤結果。
操作前
應對實驗的物理參數有充分的了解，如環境溫度(保持在18C～25℃)、反應孵育溫度和孵育時間、洗滌的次數等，要先查看水育箱溫度，ELISA試劑盒是否符合要求。
正確使用
加樣器加樣器應垂直加入標本或試劑，避免刮擦包被板底部。加樣過程中避免液體外濺，血清殘留在反應孔壁上，加樣器吸頭要清洗干凈，避免污染，加樣次序要與說明書一致，否則可導致結果錯誤，實驗重復性差。
手工洗板
加洗液時沖擊力不要太大，洗滌次數不要超過說明書推薦的洗滌次數，洗液在反應孑L內滯留的時間不宜太長。不要使洗液在孑L間竄流，造成孔問污染，導致假陰性或假陽性。
保證液量
ELISA試劑盒在使用時感覺滴瓶加液不如加樣器好，滴瓶不易控制加液量不準，造成顯色不統一，判斷錯誤。顯色液量不可過多加樣的工作環境不能處于陽光直射的環境下，加顯色系統后要避光反應，顯色液量不能過多，以免顯色過強。