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技術文章
alamarBlue的用法
點擊次數：2656 發布時間：2010-12-3
alamarBlue的用法
| 貼壁細胞和非貼壁細胞都適用。所有操作在無菌條件下進行。避免污染細胞，因為微生物污染也會還原alamarBlueTM，培養基中應添加抗生素如青霉素G（1U/ml）、兩性霉素B（amphotericin B，0.0025ug/ml）。 氧化還原指示劑是pH敏感的，推薦使用磷酸緩沖液。10％胎牛血清對比色法檢測無影響，但是會淬滅部分熒光；因此，用熒光法檢測時對照溶液中需添加10％BSA。酚紅對檢測也有一定影響，結果會上調0.03%。一般來說，應使用非還原性的培養基，如RPMI1640、Hank’s－Eagle或 Dulbecco’s－Eagle。 在特殊系統中使用時，細胞密度、孵育時間、培養基成分及使用濃度等條件需要先優化。 收集需檢測的細胞，以優化的密度鋪于加入10％（v/v）alamarBlueTM的新鮮培養基上， 1、 細胞培養：RPMI培養基，添加HEPES、10％胎牛血清、1％谷氨酸鹽、適當的抗生素； 2、 細胞覆蓋率達80％時，用胰酶消化鋪于微孔板中，密度在每孔825~80000個細胞。 3、 1個小時后，加入alamarBlueTM，37℃ 5％CO2培養 4、 到預定的時間點后檢測alamarBlueTM的還原情況 注意：若檢測的還原度不夠，可選擇繼續培養再檢測，這是該方法的一大*之處 研究特殊藥物對細胞周期的影響（如roscovitine，一種抗癌藥、周期蛋白激酶抑制劑），胰酶消化細胞、收集并鋪于含藥物的培養基上，37℃ 5％CO2培養2天；除去之前的培養基換上含10％（v/v）alamarBlueTM的新培養基，在預定的時間點檢測其還原度。 |
| 貼壁細胞和非貼壁細胞都適用。所有操作在無菌條件下進行。避免污染細胞，因為微生物污染也會還原alamarBlueTM，培養基中應添加抗生素如青霉素G（1U/ml）、兩性霉素B（amphotericin B，0.0025ug/ml）。 氧化還原指示劑是pH敏感的，推薦使用磷酸緩沖液。10％胎牛血清對比色法檢測無影響，但是會淬滅部分熒光；因此，用熒光法檢測時對照溶液中需添加10％BSA。酚紅對檢測也有一定影響，結果會上調0.03%。一般來說，應使用非還原性的培養基，如RPMI1640、Hank’s－Eagle或 Dulbecco’s－Eagle。 在特殊系統中使用時，細胞密度、孵育時間、培養基成分及使用濃度等條件需要先優化。 收集需檢測的細胞，以優化的密度鋪于加入10％（v/v）alamarBlueTM的新鮮培養基上， 1、 細胞培養：RPMI培養基，添加HEPES、10％胎牛血清、1％谷氨酸鹽、適當的抗生素； 2、 細胞覆蓋率達80％時，用胰酶消化鋪于微孔板中，密度在每孔825~80000個細胞。 3、 1個小時后，加入alamarBlueTM，37℃ 5％CO2培養 4、 到預定的時間點后檢測alamarBlueTM的還原情況 注意：若檢測的還原度不夠，可選擇繼續培養再檢測，這是該方法的一大*之處 研究特殊藥物對細胞周期的影響（如roscovitine，一種抗癌藥、周期蛋白激酶抑制劑），胰酶消化細胞、收集并鋪于含藥物的培養基上，37℃ 5％CO2培養2天；除去之前的培養基換上含10％（v/v）alamarBlueTM的新培養基，在預定的時間點檢測其還原度。 |
| 貼壁細胞和非貼壁細胞都適用。所有操作在無菌條件下進行。避免污染細胞，因為微生物污染也會還原alamarBlueTM，培養基中應添加抗生素如青霉素G（1U/ml）、兩性霉素B（amphotericin B，0.0025ug/ml）。 氧化還原指示劑是pH敏感的，推薦使用磷酸緩沖液。10％胎牛血清對比色法檢測無影響，但是會淬滅部分熒光；因此，用熒光法檢測時對照溶液中需添加10％BSA。酚紅對檢測也有一定影響，結果會上調0.03%。一般來說，應使用非還原性的培養基，如RPMI1640、Hank’s－Eagle或 Dulbecco’s－Eagle。 在特殊系統中使用時，細胞密度、孵育時間、培養基成分及使用濃度等條件需要先優化。 收集需檢測的細胞，以優化的密度鋪于加入10％（v/v）alamarBlueTM的新鮮培養基上， 1、 細胞培養：RPMI培養基，添加HEPES、10％胎牛血清、1％谷氨酸鹽、適當的抗生素； 2、 細胞覆蓋率達80％時，用胰酶消化鋪于微孔板中，密度在每孔825~80000個細胞。 3、 1個小時后，加入alamarBlueTM，37℃ 5％CO2培養 4、 到預定的時間點后檢測alamarBlueTM的還原情況 注意：若檢測的還原度不夠，可選擇繼續培養再檢測，這是該方法的一大*之處 研究特殊藥物對細胞周期的影響（如roscovitine，一種抗癌藥、周期蛋白激酶抑制劑），胰酶消化細胞、收集并鋪于含藥物的培養基上，37℃ 5％CO2培養2天；除去之前的培養基換上含10％（v/v）alamarBlueTM的新培養基，在預定的時間點檢測其還原度。 |
氧化還原指示劑是pH敏感的，推薦使用磷酸緩沖液。10％胎牛血清對比色法檢測無影響，但是會淬滅部分熒光；因此，用熒光法檢測時對照溶液中需添加10％BSA。酚紅對檢測也有一定影響，結果會上調0.03%。一般來說，應使用非還原性的培養基，如RPMI1640、Hank’s－Eagle或 Dulbecco’s－Eagle。
在特殊系統中使用時，細胞密度、孵育時間、培養基成分及使用濃度等條件需要先優化。
收集需檢測的細胞，以優化的密度鋪于加入10％（v/v）alamarBlueTM的新鮮培養基上，
1、 細胞培養：RPMI培養基，添加HEPES、10％胎牛血清、1％谷氨酸鹽、適當的抗生素；
2、 細胞覆蓋率達80％時，用胰酶消化鋪于微孔板中，密度在每孔825~80000個細胞。
3、 1個小時后，加入alamarBlueTM，37℃ 5％CO2培養
4、 到預定的時間點后檢測alamarBlueTM的還原情況
注意：若檢測的還原度不夠，可選擇繼續培養再檢測，這是該方法的一大*之處
研究特殊藥物對細胞周期的影響（如roscovitine，一種抗癌藥、周期蛋白激酶抑制劑），胰酶消化細胞、收集并鋪于含藥物的培養基上，37℃ 5％CO2培養2天；除去之前的培養基換上含10％（v/v）alamarBlueTM的新培養基，在預定的時間點檢測其還原度。