液相色譜儀維修有高招！

可能原因：

(1)在柱內沉積乙酸銨等緩沖溶液鹽；

（2）樣品污染沉積；

解決方法：

對于種情況，柱子在40-50℃下用純水洗滌，低速正向沖洗。當塔壓逐漸降低時，流速隨之增加。柱壓顯著降低后，在室溫下用純水沖洗柱子，然后用純甲醇沖洗柱子30分鐘。

在第二種情況下,樣品的污染造成的存款使用C18柱,和水反洗柱,甲醇洗,然后用甲醇+異丙醇(4 + 6)沖洗柱子,再用甲醇洗,然后以清水洗凈即可,甲醇洗是洗列超過30分鐘。

2. 指示

可能原因：

(1)泵密封墊片磨損；

(2)大量氣泡進入泵體。

解決方法：

對于種情況，更換密封墊；對于第二種情況，在泵的出口處使用50毫升玻璃注射器以幫助泵工作時抽出空氣。

3. 不穩定

可能原因：

寶石球與系統中的空氣座或單向閥之間有異物，因此兩者不能密封。

解決方法：

應注意觀察處理過程中流動相的數量，以確保不銹鋼過濾器沉入貯液瓶底部，以避免吸入空氣，移動相應*脫氣。如果異物夾在單向閥和閥座之間，則拆卸單向閥并將其放置在裝有丙酮的燒杯中進行超聲波清洗。

4. 峰分叉

可能原因：

（1）色譜柱被污染；

（2）柱頭填料塌陷；

解決方法：

對于種情況，先用純水反洗，然后用甲醇代替，然后用甲醇+異丙醇(4+6)清洗(洗滌時間的長短取決于樣品的污染程度)，然后用甲醇沖洗，然后用純水沖洗，然后用甲醇直接沖洗柱30分鐘以上。如果清洗后的峰值仍不佳，則考慮第二種情況。

對于第二種情況，松開柱子以檢查填料是硬的還是塌陷的。拆卸硬化部分(受污染的填料)，加入新填料，滴下一滴甲醇，沉淀，填充，用與柱直徑相同的光滑頂部不銹鋼棒壓榨，填充，滴下甲醇，再按幾次直到填充。用甲醇沖洗汽缸，擦拭柱外壁的填料，擰緊汽缸，用純甲醇沖洗30分鐘以上。

5. 重復性差

可能原因：

（1）進樣閥漏液；

（2）加樣針不到位；

（3）液量不足；

解決方法：

對于種情況，更換注射閥墊圈。

第二個病例是確保針后,樣品溶液注入后必須快速、順利從負載狀態轉換注入條件,確保數量的樣本的準確性。

此外，在日常工作中，保持液相色譜儀是非常重要的：

(1)小心不要讓空氣進入輸液系統和高壓泵。如果儲集層中的溶液長期不使用，則應進行清洗和更換，每次使用色譜儀后，必須用純凈水沖洗緩沖液，以防止無機鹽的沉淀或沉淀；

（2）樣品前處理也是非常重要的。任何樣品都應盡可能除去雜質，*溶解，并盡量減少色譜柱的污染，從而延長色譜柱的使用壽命，同時避免注入過濃的樣品溶液，從而避免堵塞色譜柱。由樣品閥內殘留液體的固體沉淀作用；

(3)色譜柱應貼上標簽，用于不同分析目的色譜柱不應混合等。

6.其他原因和解決辦法

故障類型的可能原因的解決方案

基線噪聲大

隨機性.污染物堆積洗滌柱.凈化樣品.hplc級溶劑

連續檢測燈故障更換紫外線燈（壽命1000小時）

機會——使用特殊的穩定器LC系統外部的電子干擾

樣品大小應為流動相樣品大小的1/6。

雙峰

樣品大小應為流動相樣品大小的1/6。

弱注入溶劑或流動相的過度使用

具有0.5μm孔隙度的在線過濾器，由過濾元件堵塞代替

填充用玻璃珠或填料填充；填充一欄。

在更換取樣器轉子時，取樣器的流道不平坦。

柱頂充滿填料或玻璃珠的柱頂。

使用較高固定相負載的柱上樣品過載增加了柱直徑并減小了樣品體積

單峰,破壞蛋白質純化樣品,初步分離

拖尾峰

開始出雙峰請參見雙峰

未掃死體積的存在減少了接頭的數量，以確保噴油器墊圈緊固，以確保接頭是正確固定的。

聚合物固定相取代堿性化合物及硅醇相互作用

堿-硅醇相互作用使用更強的移動相或添加競爭性堿

硅膠基柱-用特殊色譜柱降解；聚合物柱或立體電阻

峰展寬

降低樣品注入溶劑的強度，濃縮溶質。

注入閥中的峰值擴散通過在注入前后引入氣泡來減少擴散

數據系統采樣率過低與采樣率提高

檢測器時間常數與峰值寬度匹配的低調節時間常數

流動相溫度高粘度增加列

探測器電池體積太大，不能用得越小越好(系統中沒有熱交換器)。

注射器體積過大，無法減少注射量

使用梯度洗脫或強流動相保留長時間

壓力波動

單向閥泄漏更換單向

泵密封墊片泄漏更換

顆粒堆積過濾樣品在線過濾流動相

壓力漸增

顆粒堆積過濾樣品在線過濾流動相

水/有機體系.緩沖沉淀試驗緩沖器.有機混合物

保留超出總滲透體積

通過添加流動相改性劑或改變溶劑，體積排除特異性相互作用

保留時間不斷變

動態柱溫度改變柱溫度;絕緣材料;確保實驗室溫度恒定

平衡時間不足以滿足梯度洗脫要求，或等距洗脫流動相變化，以確保至少10個柱體積通過色譜柱后，溶劑變化或梯度末端。

選擇性蒸發流動相組分以減少氦的強烈脫氣；保持溶劑貯器的覆蓋；制備新的流動相

緩沖液濃度大于20mM時，緩沖容量不足。

在線流動相混合不一致，以確保梯度系統的恒定組成；手動準備流動相檢查

污穢堆積沖洗柱去除污染物

前幾次進樣-吸附在活性部位用濃縮樣品清洗柱，使其處于正常狀態。

保留時間逐漸縮短

流量在增加，以檢查泵是否正確；否則，必須重新設置。

柱上進樣超載減少樣品

鍵合固定相的損失使流動相的pH值保持在2～8.5之間。

保留時間逐漸增加

速度慢解決泄漏的液體流動現象,更換泵密封,檢查泵的渦流和泡沫

硅膠填料活點流動相改性劑的應用

鍵合固定相的損失使流動相的pH值保持在2～8.5之間。

流動相組成發生變化，保證了流動相容器的封蓋良好。

活性點硅膠填料流動相競爭堿的研究

硅膠填料活點固定相覆蓋度高的填料

靈敏度問題

在探測器的線性范圍以外稀釋或濃縮，使其處于線性范圍。

初始取樣-樣品被吸附在樣品池或柱中，自動取樣器的流動路徑被濃縮的樣品處理單元/柱堵塞。

自動取樣器流路堵塞檢查流速情況，確保無堵塞現象

定量取樣器取樣管不充滿,以確保樣品池中的完整的樣品

采用內標法制備樣品，優化樣品制備方法。

柱平衡時間減慢(離子對現象)

長鏈離子對試劑平衡時間慢用短鏈烷烴試劑