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能夠把這些復(fù)雜的評估分析法由繁化簡，并快速完成分析的HPLC色譜柱就是TSKgel FcR-IIIA-NPR。

使用TSKgel FcR-IIIA-NPR色譜柱可以直接分離抗體，無需對細胞培養(yǎng)液進行前處理。抗體主要可以分離出3個洗脫峰。已有研究表明，抗體糖鏈末端的半乳糖數(shù)量越多，在此色譜柱中的保留能力越強，而保留能力越強的洗脫峰，其ADCC活性就越高。

細胞培養(yǎng)液中單克隆抗體的分離

TSKgel FcR-IIIA-NPR色譜柱可以用來測定和監(jiān)控細胞培養(yǎng)時抗體糖鏈的性狀變化。取不同培養(yǎng)天數(shù)的細胞培養(yǎng)液，使用Protein A填料對抗體樣品粗純后，再采用TSKgel FcR-IIIA-NPR色譜柱分析的結(jié)果如下圖所示。

抗體細胞培養(yǎng)天數(shù)和產(chǎn)生抗體的變化

隨著培養(yǎng)天數(shù)的延長，抗體的3個洗脫峰會向前側(cè)的洗脫峰位移。雖然延長了細胞培養(yǎng)天數(shù)，抗體的產(chǎn)量增加，但是由于受到細胞外糖鏈修飾酶的影響，在色譜柱中的保留能力較高的抗體（多糖的末端半乳糖數(shù)量較多的抗體）的洗脫峰反而減少了。因此，可以推定產(chǎn)生的抗體的ADCC活性已經(jīng)降低。

TSKgel FcR-IIIA-NPR的主要分析用途

①確認不同細胞株(CHO細胞、HEK細胞等)中抗體的性狀變化。

②確認多個細胞株篩選時抗體的性狀變化。

③確認當(dāng)改變細胞培養(yǎng)基添加劑時抗體的性狀變化

④細胞培養(yǎng)過程中隨培養(yǎng)天數(shù)的變化導(dǎo)致抗體性狀變化的確認。

⑤細胞培養(yǎng)規(guī)模放大(更改培養(yǎng)方法)時，確認抗體是否發(fā)生性狀變化。