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技術文章

原代培養技術的重點關注事項

閱讀:160          發布時間:2024-1-8

     原代培養:字面意思即第1次培養,但實際上,通常把第1代至第10代以內的培養細胞統稱為原代細胞培養。 原代培養技術的重點關注事項:

一、注意污染

1、嚴格進行動物皮膚消毒,使用三套器械取材。新生動物皮膚先用2%碘酒液消毒,成年鼠先用3%~5%碘酒液消毒后用75%酒精消毒。
2、嚴格進行無菌操作,防止細菌、霉菌、支原體污染,避免化學物質污染。自取材開始,保持所有組織細胞處于無菌條件。細胞計數可在有菌環境中進行。
3、吸取液體前,瓶口和吸管進行火焰消毒;吸取液體時,避免瓶口和吸管碰撞。
4、離心管入臺前,管口、管壁應消毒。
5、實驗者離開超凈臺時,要隨時用肘部關閉工作窗。
6、使用過的器械用酒精棉球擦去血污后,移入另一個器皿中繼續消毒,在浸泡器械時剪刀口要叉開放,鑷子彎頭要向下放,并加蓋消毒。凡在超凈臺外操作的步驟,各器皿需用蓋子或橡皮塞,以防止細菌落入。
二、器材使用時既要注意用火焰消毒,又要防止燙傷、燙死細胞。經火焰消毒后的吸管一定要用Hanks液冷卻。
三、超凈臺內溫度、濕度較大,在夏天工作時臺內散熱更慢,因此進行細胞懸液混勻、接種時,離火焰要稍微遠些,組織細胞、培養液等不能暴露過久,以免溶液蒸發。


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