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產(chǎn)品分類(lèi)：DNA溶液

儲(chǔ)存條件：室溫,12個(gè)月

用途：常規(guī)緩沖液,濃縮分離病毒

注意事項(xiàng)：無(wú)菌溶液。主要由Tris、EDTA、NaCl組成。

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱(chēng)量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來(lái)水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱(chēng)量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱(chēng)取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線(xiàn)，搖勻。

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來(lái)，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過(guò)2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

慢生根瘤菌胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白樣1抗體Human PTBP2 ELISA Kit抑瘤M(OSM)

嗜松青霉免疫球蛋白D重鏈保守區(qū)抗體Human PSTPIP1 ELISA Kit異質(zhì)性胞核核糖核蛋白R(shí)(hnRNP R)

膠孢IV型己糖激抗體Human PTBP1 ELISA Kit異質(zhì)性胞核核糖核蛋白P2(hnRNP P2)

大腸埃希氏菌宿主免疫球蛋白lambda樣肽1抗體Human PTCD3 ELISA Kit異質(zhì)性胞核核糖核蛋白M(hnRNP M)

澳型核果褐腐病菌NF-kappa-B抑制子beta抗體Human PTCH1 ELISA Kit異質(zhì)性胞核核糖核蛋白L(hnRNP L)

灰略紅鏈霉菌NF-kappa-B抑制子epsilon抗體Human PTCH2 ELISA Kit異質(zhì)性胞核核糖核蛋白K(hnRNP K)

棱柱散尾菌中華變型絲/蘇蛋白激ICK抗體Human PTAFR ELISA Kit異質(zhì)性胞核核糖核蛋白I(hnRNP I/PTB)

日內(nèi)瓦毛霉纖毛內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)同源蛋白172抗體Human PTBP1 ELISA Kit異質(zhì)性胞核核糖核蛋白H(hnRNP H)

朱紅栓菌絲/蘇蛋白激ICK抗體Human PTBP2 ELISA Kit異質(zhì)性胞核核糖核蛋白G(hnRNP G)

慢生根瘤菌肽酰tRNA水解ICT1抗體Human PTCD3 ELISA Kit異質(zhì)性胞核核糖核蛋白E(hnRNP E)

解脂亞羅酵母alpha干擾誘導(dǎo)蛋白27抗體Human PTCH1 ELISA Kit異質(zhì)性胞核核糖核蛋白D(hnRNP D)

弗氏檸檬桿菌纖毛內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)同源蛋白81抗體Human PTCH2 ELISA Kit異質(zhì)性胞核核糖核蛋白C(hnRNP C)

鴨疫里氏桿菌Gamma干擾誘導(dǎo)蛋白16抗體Human PSME4 ELISA Kit異質(zhì)性胞核核糖核蛋白A3(hnRNP A3)

焦曲霉異檸檬脫氫3 beta亞基抗體Human PSME3 ELISA Kit異質(zhì)性胞核核糖核蛋白A2/B1(hnRNP A2/B1)

貽貝弧菌干擾誘導(dǎo)的三角形四肽重復(fù)蛋白1抗體Human PSMF1 ELISA Kit異質(zhì)性胞核核糖核蛋白A1(hnRNP A1)

蘇云金芽孢桿菌異檸檬脫氫gamma亞基抗體Human PSMG2 ELISA Kit異質(zhì)性胞核核糖核蛋白A0(hnRNP A0)

: B687資源名稱(chēng): 熒光假單胞菌 質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)白花前胡

: T.6757F3資源名稱(chēng): 傷菌 質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(HPLC)(R型)人參皂苷Rh2

酵母菌Saccharomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格：用于高效液相色譜標(biāo)記仙茅苷
NTE緩沖液Cav-1 ELISA Kit  大鼠窖蛋白Caveolin1規(guī)格： 48T

VEGF ELISA KIT   大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子規(guī)格： 48T

TNF- Alpha ELISA KIT  大鼠腫瘤壞死因子α規(guī)格： 48T

TGF- Beta1 ELISA kit  大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1規(guī)格： 48T

SCF/MGF ELISA Kit  大鼠干細(xì)胞因子/肥大細(xì)胞生長(zhǎng)因子規(guī)格： 48T

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線(xiàn)（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線(xiàn)，來(lái)確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線(xiàn)的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過(guò)建立殺滅曲線(xiàn)（劑量反應(yīng)曲線(xiàn)）來(lái)實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過(guò)夜；注：對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀(guān)察并評(píng)估細(xì)胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類(lèi)型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。