AB102 3ml中量全血DNA提取試劑盒
| 參考價(jià) | ￥ 12 |
| 訂貨量 | ≥1 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
- 公司名稱 北京艾比根生物技術(shù)有限公司
- 品牌
- 型號(hào) AB102
- 產(chǎn)地 北京艾比根
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時(shí)間 2017/8/20 0:29:37
- 訪問次數(shù) 590
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v 適用范圍：
適用于快速提取各種動(dòng)物全血基因組DNA
v 試劑盒組成、儲(chǔ)存、穩(wěn)定性：
| 試劑盒組成 | 保存 | 20次×3ml AB1021 | 50次×3ml AB1022 | 100次×3ml AB1023 |
| 10×紅細(xì)胞裂解液 | 室溫 | 20 ml | 45ml | 95ml |
| 細(xì)胞核裂解液 | 室溫 | 60 ml | 150 ml | 300ml |
| 蛋白沉淀液 | 室溫 | 20 ml | 50 ml | 100ml |
| DNA溶解液 | 室溫 | 10 ml | 20 ml | 40ml |
本試劑盒在室溫儲(chǔ)存18個(gè)月不影響使用效果。
儲(chǔ)存事項(xiàng):
1. 環(huán)境溫度低時(shí)細(xì)胞核裂解液中某些去污劑成份會(huì)析出出現(xiàn)渾濁或者沉淀，可在37℃水浴加熱幾分鐘，即可恢復(fù)澄清，不要?jiǎng)×覔u晃，以免形成過量的泡沫。
2. 蛋白沉淀液可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，如果不能*溶解，也不影響使用效果，直接取用上層溶液即可。
3. 避免試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生pH值變化，各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子。
v 產(chǎn)品介紹：
本試劑盒根據(jù)全血特點(diǎn)采用幾個(gè)快速步驟提取基因組DNA。首先紅細(xì)胞裂解液裂解去除紅細(xì)胞，細(xì)胞核裂解液裂解白細(xì)胞釋放出基因組DNA, 然后蛋白沉淀液選擇性沉淀去除蛋白，zui后純凈的基因組DNA通過異丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。
v 注意事項(xiàng)
1. 用戶需自備異丙醇和70％乙醇。
2. 典型的產(chǎn)量3ml全血可提取出75-150µg基因組DNA（不同樣品尤其疾病樣品中中白細(xì)胞數(shù)量差異可能非常大，因此產(chǎn)量的個(gè)體差異也可能非常大）。
3. 本試劑盒為溶液型，可以很容易的按照比例擴(kuò)大或者縮小每次處理的全血量（20µl-10ml），請(qǐng)索取其它處理量的操作手冊(cè)。
4. 本試劑盒可運(yùn)用于多種抗凝劑的全血，如EDTA、檸檬酸、肝素抗凝血。其中由于肝素抗凝血的白細(xì)胞沉淀團(tuán)很難打散重懸，影響裂解效果，建議選用非肝素的抗凝劑收集血液標(biāo)本。
5. 為了*效果，使用新鮮血液標(biāo)本或者4℃存放小于3天的標(biāo)本，不要使用反復(fù)凍融超過3次的標(biāo)本，否則會(huì)嚴(yán)重降低產(chǎn)量。
6. 對(duì)于每個(gè)樣品提取血量大或者用量大的客戶，可以和我們，我們另有專門準(zhǔn)備有優(yōu)惠的大包裝試劑。
v 操作步驟：（實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)先閱讀注意事項(xiàng)）
使用前應(yīng)該用去離子水將10x紅細(xì)胞裂解液稀釋10倍到1x。
2. 將抗凝全血（使用前回復(fù)到室溫）顛倒混勻后，吸取3ml加到上步裝有紅細(xì)胞裂解液離心管中，顛倒6-8次，并倒置輕彈管壁，確保充分混勻。
3. 室溫放置10分鐘（期間應(yīng)該顛倒輕彈混勻數(shù)次幫助裂解紅細(xì)胞）。
4. 2,500 x g離心2分鐘，倒棄紅色上清，并小心的盡可能多的吸棄上清（注意不要吸到管底的細(xì)胞團(tuán)），留下完整的管底白細(xì)胞團(tuán)和大約50μl的殘留上清。
離心后在管底應(yīng)該見到白色的白細(xì)胞團(tuán)，也可能有一些紅細(xì)胞殘片和白細(xì)胞團(tuán)在一起，但是如果看到的是大部分的紅色細(xì)胞團(tuán)，說明紅細(xì)胞裂解很不充分，應(yīng)該再加入適量紅細(xì)胞裂解液重懸細(xì)胞團(tuán)后重復(fù)步驟3，4。
5. 渦旋振蕩直到白細(xì)胞團(tuán)充分重懸、分散。
白細(xì)胞的重懸分散對(duì)下一步裂解非常重要，白細(xì)胞未打散就加入裂解液，會(huì)導(dǎo)致白細(xì)胞不能充分裂解，形成肉眼可見團(tuán)塊。
6. 3ml細(xì)胞核裂解液到重懸的白細(xì)胞，上下吹打裂解白細(xì)胞，或者劇烈渦旋10秒幫助裂解白細(xì)胞。加入
7. 可選步驟: 在裂解物中加入RNase A（10mg/ml）至終濃度30μg/ml，顛倒25次混勻，37℃溫育15分鐘去除殘留RNA，然后冷卻回室溫。
8. 加入1ml蛋白沉淀液后，在渦旋振蕩器上高速連續(xù)振蕩混勻25秒。混勻后可能見到一些小的蛋白團(tuán)塊。
9. 2,500 x g（可根據(jù)需要調(diào)整加大離心力）離心5分鐘。這時(shí)候應(yīng)該可以見到管底暗褐色的蛋白沉淀，也可能見到一些蛋白沉淀漂浮在液體表面。
10. 小心吸取上清（大約3ml）到一個(gè)新的15ml離心管中。
吸取上清時(shí)，注意不要吸到管底的和漂浮在液體表面的蛋白沉淀。如果不小心將蛋白沉淀轉(zhuǎn)入新的離心管中，可再次離心2分鐘后取上清。
11. 加入等體積的室溫異丙醇（3ml），輕柔顛倒30次混勻或者直到出現(xiàn)棉絮狀（絲狀）白色DNA沉淀。
12. 2,000 x g離心3分鐘，在管底可以見到白色的DNA沉淀塊，倒棄上清。
13. 加入3ml 70％乙醇，顛倒幾次漂洗DNA沉淀，2,000 x g離心1分鐘, 倒去上清（沉淀很松，注意不要把DNA沉淀倒掉了），倒置后在吸水紙上輕敲幾下以控干殘留乙醇，還可以用槍頭小心吸掉管底沉淀周圍和管壁的殘留乙醇，空氣晾干沉淀幾分鐘。
注意不要干燥過頭，否則DNA極其難溶；也不能殘留太多乙醇，否則乙醇可能抑制下游如酶切反應(yīng)。
14. 加入250μlDNA溶解液重新水化溶解DNA沉淀，輕彈管壁混勻，可以放置在65℃溫育30-60分鐘（不要超過一小時(shí)），也可以在室溫或者4℃放置過夜來重新水化DNA，中間不時(shí)的輕彈管壁幫助重新水化DNA。
15. DNA可以存放在2-8℃,如果要長(zhǎng)時(shí)間存放，可以放置在－20℃。
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