N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（N-acetyl-β-D-glucosidase, NAG） 試劑盒

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

NAG 是溶酶體中的一種酸性水解酶，廣泛存在于各種組織、體液和細胞中，以前列腺和腎近曲小管細胞內含量最高。NAG 活性變化與機體某些病理狀態(tài)密切相關。

測定原理： 

NAG 分解 β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成對-硝基苯酚，后者在 400nm 有最大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算 NAG 活性。

自備用品：

酶標儀/可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、96 孔板/微量石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：粉劑×1 瓶，-20℃保存；臨用前加入 2.5mL 蒸餾水，充分溶解備用；用不完的試劑仍-20℃保存。

試劑二：液體 4mL×1 瓶，4℃保存。試劑三：液體 13mL×1 瓶，4℃保存。粗酶液提取：

1、細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量

（10⁴ 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）； 15000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2、組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進行冰浴勻漿。15000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

3、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1、 酶標儀或分光光度計預熱 30min 以上，調節(jié)波長至 400nm，蒸餾水調零。

2、樣本測定（在 EP 管或 96 孔板中依次加入下列試劑）：

迅速混勻，放入 37℃保溫 30min

充分混勻， 400nm 處測定吸光值 A，計算 ΔA=A 測定-A 對照。每個測定管需設一個對照管。

NAG 活性計算：

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、標準條件下測定的回歸方程為 y = 0.00585x +0.0083；x 為標準品濃度（nmol/mL），y 為吸光值。

2、血清（漿）NAG 活力的計算

單位的定義：每 mL 血清（漿）每分鐘產生 1nmol 對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。

NAG 活力(nmol /min/mL)= [(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V 反總]÷V 樣÷T =39.89×(ΔA-0.0083)

3、細胞、細菌和組織中 NAG 活力的計算

（1） 按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘產生 1nmol 對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。

NAG 活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V 反總]÷(V 樣×Cpr)÷T

=39.89×(ΔA-0.0083) ÷Cpr

（2） 按樣本鮮重計算：

單位的定義：每 g 組織每分鐘產生 1nmol 對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。

NAG 活性(nmol/min/g 鮮重)= [(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V 反總]÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T

=39.89×(ΔA-0.0083)÷W

（3） 按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每分鐘產生 1nmol 對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。

NAG 活性(nmol/min /10⁴cell) =[(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V 反總]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T

=0.08×(ΔA-0.0083)

V 反總：反應體系總體積，0.07mL；V 樣：加入反應體系中樣本體積，0.01mL；V 樣總： 加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g； 500：細胞或細菌總數(shù)，500 萬；T：反應時間，30min。

b. 用 96 孔板測定的計算公式如下

1、標準條件下測定的回歸方程為 y = 0.0039x +0.0083；x 為標準品濃度（nmol/mL），y 為吸

光值。

2、血清（漿）NAG 活力的計算

單位的定義：每 mL 血清（漿）每分鐘產生 1nmol 對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。

NAG 活力(nmol /min/mL)= [(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V 反總]÷V 樣÷T =59.83×(ΔA-0.0083)

3、細胞、細菌和組織中 NAG 活力的計算

（1） 按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘產生 1nmol 對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。

NAG 活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V 反總]÷(V 樣×Cpr)÷T

=59.83×(ΔA-0.0083) ÷Cpr

（2） 按樣本鮮重計算：

單位的定義：每 g 組織每分鐘產生 1nmol 對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。

NAG 活性(nmol/min/g 鮮重)= [(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V 反總]÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T

=59.83×(ΔA-0.0083)÷W

（3） 按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每分鐘產生 1nmol 對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。

NAG 活性(nmol/min /10⁴cell) =[(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V 反總]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T

=0.12×(ΔA-0.0083)

V 反總：反應體系總體積，0.07mL；V 樣：加入反應體系中樣本體積，0.01mL；V 樣總： 加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g； 500：細胞或細菌總數(shù)，500 萬；T：反應時間，30min。

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3、本產品僅供科學研究或進一步生產使用，不可用于臨床診斷或治療。

N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（N-acetyl-β-D-glucosidase, NAG） 試劑盒