Edman降解測序：一種可靠的N端蛋白分析方法檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹

引言：jīngzhǔn識(shí)別N端序列，為蛋白研究打下基礎(chǔ)

在dànbáizhì研究中，氨基酸序列的jīngquè鑒定是理解其功能與結(jié)構(gòu)的dìyī步。雖然現(xiàn)代質(zhì)譜技術(shù)已在dànbáizhì組學(xué)領(lǐng)域大放異彩，但在某些特定場景下，一種經(jīng)典的序列分析方法依然bùkěhuòquē——Edman降解（Edman degradation）。這種以化學(xué)方式從N-端逐步解析dànbáizhì序列的技術(shù)，因其高特異性和準(zhǔn)確度，至今仍廣泛應(yīng)用于蛋白表達(dá)驗(yàn)證、N端修飾檢測、質(zhì)量控制等多個(gè)關(guān)鍵領(lǐng)域。作為dànbáizhì測序服務(wù)的重要組成部分，Edman降解為科研人員提供了一種低偏差、高保真度的Nduāncèxù手段。在百泰派克生物科技，我們結(jié)合自動(dòng)化Edman測序平臺(tái)與高質(zhì)量純化流程，為客戶提供jīngzhǔn可靠的N端序列解析解決方案，助力基礎(chǔ)研究與生物制藥開發(fā)。

一、什么是Edman降解？

Edman降解是一種基于化學(xué)反應(yīng)的順序性Nduāncèxù方法，由Pehr Edman于1950年提出。其核心原理在于使用苯異硫氰酸（PITC）與dànbáizhìN端的游離氨基反應(yīng)，形成一種可切割的衍生物，隨后經(jīng)酸水解釋放出dìyī個(gè)氨基酸殘基并進(jìn)行鑒定。此過程可在保留剩余肽鏈完整性的前提下循環(huán)進(jìn)行，從而一步步解碼dànbáizhì的N端序列。

Edman反應(yīng)的三步核心流程：

1、PITC標(biāo)記：在堿性條件下，PITC與肽鏈N端氨基結(jié)合，形成苯異硫氰酸酰胺。

2、酸解釋放：加入無水酸催化斷裂，使N端氨基酸以可識(shí)別的形式（PTH-AA）釋放。

3、序列循環(huán)：殘余肽鏈再次進(jìn)入下一輪循環(huán)，重復(fù)上述步驟。

目前，市面上已發(fā)展出多種自動(dòng)化Edman測序儀，使得該技術(shù)可對純化蛋白樣本進(jìn)行高達(dá)30個(gè)氨基酸殘基的順序解析，具有良好的重復(fù)性與穩(wěn)定性。

二、Edman降解的優(yōu)勢與局限性

盡管質(zhì)譜技術(shù)的興起為dànbáizhì組學(xué)打開了新天地，但Edman降解依然以其化學(xué)反應(yīng)的確定性和序列位點(diǎn)的準(zhǔn)確性在多個(gè)關(guān)鍵場景下保有一席之地。

1、優(yōu)勢：

（1）高度特異性：僅對N端游離氨基起反應(yīng)，避免其他位點(diǎn)干擾。

（2）序列位置確定：每次循環(huán)均從N端開始，序列定位準(zhǔn)確。

（3）適用于蛋白表達(dá)驗(yàn)證：可與理論序列比對，確認(rèn)表達(dá)產(chǎn)物正確性。

（4）檢測翻譯后修飾：能直接判斷N端是否有乙酰化、甲酰化等封閉修飾。

2、局限性：

（1）樣本要求高：必須為純化蛋白，N端不能被封閉或修飾。

（2）測序長度有限：一般zuì多測定20~30個(gè)氨基酸。

（3）通量較低：不適用于復(fù)雜混合物或高通量分析。

因此，在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)階段，研究人員需權(quán)衡不同測序技術(shù)的適用性，以獲得zuì具信息價(jià)值的數(shù)據(jù)。

三、Edman測序在現(xiàn)代dànbáizhì研究中的應(yīng)用

1、生物藥開發(fā)與質(zhì)量控制

在重組蛋白藥物的生產(chǎn)中，N端序列是藥品一致性、穩(wěn)定性和正確表達(dá)的重要指標(biāo)。Edman測序可用于：

* 驗(yàn)證表達(dá)產(chǎn)物的N端氨基酸與設(shè)計(jì)序列是否一致

• 檢測信號肽是否成功切除

• 監(jiān)控不同批次之間的表達(dá)一致性

2、翻譯起始位點(diǎn)驗(yàn)證

在構(gòu)建表達(dá)載體時(shí)，研究人員往往關(guān)心是否從預(yù)期的起始密碼子開始翻譯。Edman降解通過直接讀取N端序列，可jīngzhǔn驗(yàn)證翻譯起始位點(diǎn)是否偏移。

3、蛋白N端修飾分析

某些蛋白可能經(jīng)歷N端乙酰化、甲酰化、胺甲酰化等修飾。當(dāng)Edman降解無法進(jìn)行時(shí)，反而說明存在封閉修飾，提示需進(jìn)一步使用質(zhì)譜進(jìn)行結(jié)構(gòu)確認(rèn)，從而構(gòu)建完整的N端修飾圖譜。

四、Edman測序與質(zhì)譜：互補(bǔ)而非替代

在現(xiàn)代dànbáizhì組學(xué)中，Edman測序與質(zhì)譜并非競爭關(guān)系，而是優(yōu)勢互補(bǔ)。質(zhì)譜具有高通量、廣覆蓋的優(yōu)勢，可快速掃描復(fù)雜樣本；而Edman降解則以其jīngzhǔn、低背景、序列位置明確的特點(diǎn)，為重點(diǎn)蛋白提供jīngzhǔn確認(rèn)。

常見的組合策略包括：

1、先質(zhì)譜、后Edman：初篩蛋白后，對關(guān)鍵條帶進(jìn)行Edman驗(yàn)證

2、Edman篩選修飾蛋白，再上LC-MS/MS定位修飾位點(diǎn)

3、抗體驗(yàn)證中同時(shí)使用質(zhì)譜和Edman，確保N端一致性

百泰派克生物科技的Nduāncèxù服務(wù)優(yōu)勢

在百泰派克生物科技，我們深知Nduāncèxù在科研和生物制藥開發(fā)中的重要性。為此，我們搭建了自動(dòng)化Edman測序平臺(tái)，配套完善的純化、定量和質(zhì)量控制體系，為客戶提供一站式N端序列分析服務(wù)。

我們的優(yōu)勢包括：

• 高靈敏度設(shè)備：搭載優(yōu)良PPSQ-51A測序儀，zuì少可識(shí)別1~5 pmol蛋白樣本

• 純化支持服務(wù)：提供SDS-PAGE條帶回收、PVDF膜轉(zhuǎn)印等前處理方案

• 多輪循環(huán)控制：zuì長可達(dá)30個(gè)氨基酸殘基，準(zhǔn)確還原N端結(jié)構(gòu)

• 詳盡報(bào)告交付：包括原始圖譜、電泳圖片、序列比對和技術(shù)說明

在如今強(qiáng)調(diào)“jīngzhǔn測序、全鏈驗(yàn)證”的時(shí)代背景下，Edman降解并未被淘汰，反而在多種新型生物制品開發(fā)中再次“回歸主場”。Edman降解測序依然憑借其化學(xué)解析的確定性和N端分析的特異性，在dànbáizhì研究領(lǐng)域保持dútè價(jià)值。它不僅是質(zhì)譜技術(shù)的重要補(bǔ)充，更在某些關(guān)鍵應(yīng)用場景中發(fā)揮著bùkětìdài的作用。百泰派克生物科技提供zhuānyè的基于Edman降解的蛋白N端序列分析服務(wù)，可解決您的項(xiàng)目問題，加速您的研究項(xiàng)目，為您帶來優(yōu)質(zhì)的服務(wù)體驗(yàn)。

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務(wù)，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務(wù)，對蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.技術(shù)優(yōu)良，*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細(xì)胞層面上對多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測分析服務(wù)；

2.獲國家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測平臺(tái)，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

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