LC-MS/MS蛋白全序列驗證檢測技術服務詳情介紹

隨著現代醫藥工業的進步，序列分析已成為dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗類生物藥物分子以及膠原蛋白等醫療器械類產品的研發和質量控制中的重要環節。dànbáizhì的全序列驗證分析扮演關鍵角色，能夠確認重組dànbáizhì多肽類生物制品的完整準確表達，確保產品質量和有效性。

百泰派克生物科技BTP基于CNAS/ISO9001雙重質量認證體系，建立蛋白測序平臺，該平臺配備多臺N端序列分析儀、超高效液相色譜高分辨質譜聯用、經過多輪優化的蛋白從頭測序算法平臺。結合優良的分析設備和算法，BTP能夠對dànbáizhì進行全序列驗證分析，確保dànbáizhì的完整性和準確性，以滿足您的研究和質量控制需求。

液質聯用（LC-MS/MS）蛋白全序列驗證分析:

蛋白全序列驗證分析的一般流程是使用特異性蛋白酶對dànbáizhì分子進行酶解切割，酶解后的供試品是復雜的肽段組成的混合物，然后通過液質聯用平臺對供試品進行質譜分析。

首先，是對樣本進行前處理，即根據蛋白全長理論氨基酸序列結合質譜級別蛋白酶酶切位點信息選擇至少五種蛋白酶對蛋白進行酶切，提高酶切效率，以便獲得更高的覆蓋度。實際實驗中可以從多種蛋白酶（Trypsin、Chymotrypsin、Asp-N、Glu-C、Lys-C和Lys-N等）中選擇合適的蛋白酶或者組合酶切的方式對靶蛋白進行酶切；其次，使用液質聯用Nano-LC-MS/MS 平臺對酶切之后的肽段混合物進行分析，得到總離子流色譜圖和質譜原始數據；然后，以所測定蛋白的理論序列建立本地數據庫，通過zhuānyè分析軟件匹配并計算每一種酶切之后鑒定到的肽段；利用酶切位點之間的互補性對蛋白序列進行拼接，zuì終實現蛋白全序列驗證。

案例示意圖:

抗體輕鏈全序列驗證分析示意圖

一般流程：

1、使用多種蛋白酶組合酶切的方式對蛋白進行酶切，提高酶切效率，以便獲得蛋白每一個氨基酸的序列信息。

2、使用 Nano-LC-MS/MS 液質聯用高分辨平臺對樣品進行分析。

3、將得到的質核比信息與理論序列建立的數據庫進行比對。

4、拼接每種酶切方式鑒定到的肽段，得到蛋白是否完整正確表達的信息。

實驗儀器:

• 液相色譜儀（Easy-nLC1200）

• 電噴霧-組合型四級桿-Orbitrap 質譜儀（Q Exactive™ HybridQuadrupole-Orbitrap™ Mass Spectrometer ）

應用:

• dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗、膠原蛋白等生物制品的氨基酸全序列驗證分析

• dànbáizhì翻譯后修飾和化學修飾分析

• dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗、膠原蛋白等生物制品的氨基酸序列突變分析

常見問題:

問題1：覆蓋度能反映什么問題呢？若覆蓋度不足100%該怎么處理？

回答：覆蓋度是指被測序到的序列占全序列大小的比率。反應了我們的測序結果對于我們蛋白的覆蓋情況，若覆蓋率為100%代表樣品經酶解處理之后得到的序列與目標序列高度吻合，若覆蓋率不足100%，我們會審查dànbáizhì數據和序列，查看缺失多少序列以及哪些理論上的肽段未檢測到；根據實際結果判斷是否繼續使用現有方法和酶解處理，重新獲得肽遺失的位置，還是蛋白樣品本身發生了突變，需要進行從頭測序分析。

問題2：想要進行測序的dànbáizhì分子量較小，如何進行蛋白樣品制備？

回答：如果蛋白分子量比較小，可以使用濃度較高的SDS-PAGE膠將dànbáizhì進行分離，然后對蛋白膠進行考馬斯亮藍染色，再將與目的蛋白大小一致的蛋白條帶切割下來，切下來的蛋白膠條用于質譜鑒定。

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對dànbáizhì序列進行分析，提供基于質譜的蛋白測序分析服務，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務，對蛋白序列進行分析。

※服務優勢：

1.采用目前世界上優良的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務優勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規模實驗分析，發現新的生物標記物;

2.體內體外多種dànbáizhì標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質譜分析靈敏度高，實驗結果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學分析，分析更系統準確。

三、單細胞質譜流式技術分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質量譜，zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。

※服務優勢：

1.技術優良，*技術空白

采用金屬標記抗體技術，避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右，而流式質譜技術一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現了數量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外，質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現

百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質譜技術，MALDI TOF，高效色譜分離技術，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析，到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務，幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質譜多組學優質服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證，建立了完備的質量體系，數據冷熱/異地備份，設備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術服務，支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。

1.公司采用ISO9001質量控制體系，zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規的藥物質量研究服務；

3.業務范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等；

4.七大質量控制檢測平臺，滿足您一站式服務需求；

5.服務3000+企業，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優質的生物質譜分析服務!

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