人登革熱 NS1 抗原ELISA試劑盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：2-8℃。

2．有效期：6個月

實驗原理

本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）測定標本中人登革熱 NS1 抗原。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中登革熱 NS1 抗原相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與 HRP 標記的抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹-底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），與 CUTOFF 值相比較，從而判定標本中人登革熱 NS1 抗原的存在與否。

試劑盒組成

130 倍濃縮洗滌液20ml×1 瓶7終止液6ml×1 瓶

2酶標試劑6ml×1/瓶8陽性對照0.5ml×1 瓶

3酶標包被板12 孔×8 條9陰性對照0.5ml×1 瓶

4樣品稀釋液6ml×1 瓶10說明書1 份

5顯色劑 A 液6ml×1 瓶11封板膜2 張

6顯色劑 B 液6ml×1 瓶12密封袋1 個

操作步驟

1.編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1

孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）

2.加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照（標準品）50µl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液 40µl，然后再加待測樣品 10µl。加樣將樣品加于酶標板孔底部， 盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，

3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.配液：將 30 倍濃縮洗滌液加蒸餾水至 600ml 后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復(fù) 5 次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。

7.溫育：操作同 3。

8.洗滌：操作同 5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑 A 50µl，再加入顯色劑 B 50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鐘

10.終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11.測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進行。

結(jié)果判定：

試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.15 臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

陰性判定：樣品 OD 值< 臨界值（CUT OFF）者為登革熱 NS1 抗原陰性陽性判定：樣品 OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為登革熱 NS1 抗原陽性

注意事項

1.操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。

2.人登革熱 NS1 抗原ELISA試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

3.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

4.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5.底物請避光保存。

6.試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準，使用雙波長檢測時，參考波長為 630nm

7.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸，使用時必須注意安全。