使用POSITISIL® ODS-BP ( 4.6*250mm ，5µm)色譜柱，參照《中國藥典》（2020年版）高效液相色譜法對附子的含量測定，檢測苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿，可滿足實驗要求。

對照品溶液的制備  取苯甲酰新烏頭原堿對照品、苯甲酰烏頭原堿對照品、苯甲酰次烏頭原堿對照品適量，精密稱定，加異丙醇-二氯甲烷（1:1）混合溶液制成每1ml各含10μg的混合溶液，即得。

供試品溶液的制備  取本品粉末（過三號篩）約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加氨試液3ml，精密加入異丙醇-乙酸乙酯（1:1）混合溶液50ml，稱定重量，超聲處理（功率300W，頻率40kHz，水溫在25℃以下）30分鐘，放冷，再稱定重量，用異丙醇-乙酸乙酯（1:1）混合溶液補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續濾液25ml，40℃以下減壓回收溶劑至干，殘渣精密加入異丙醇-二氯甲烷（1:1）混合溶液3ml溶解，濾過，取續濾液，即得。

色譜條件  

色譜柱  POSITISIL® ODS-BP ( 4.6*250mm ，5µm)

流動相  乙腈-四氫呋喃（25:15）為流動相A，以0.1mol/L醋酸銨溶液（每1000ml加冰醋酸0.5ml）為流動相B，按下表中的規定進行梯度洗脫