Dynabeads 蛋白 A 為表面共價偶聯有重組蛋白 A （～45 kDa）的 2.8 µm 均勻超順磁性微珠。Dynabeads 蛋白 A 為免疫沉淀（IP）提供了可替代 Sepharose 樹脂或瓊脂糖樹脂的出色替代產品，手動和自動方案均可用。

?在不到40分鐘內完成 IP
? 高靶蛋白得率和低抗體消耗
? 極低非特異性結合及高信噪比
? 無需色譜柱、離心步驟或耗時的預清洗步驟
?高重現性和高通量與 KingFisher 儀器兼容

小貼士：如何減少免疫沉淀中的背景

Dynabeads磁珠可以被磁化，與磁力架一起使用時，可輕松將其拉到樣品管的一側。這一特點使得移除緩沖液或上清液變得非常容易，不會造成任何破壞或樣品損失。

Dynabeads磁珠的一個關鍵特點是其表面清晰，沒有孔隙。所有的結合都發生在外表面，從而防止任何不需要的蛋白質被困在內部。

為了進一步減少免疫沉淀中的背景，建議洗滌含有感興趣蛋白質的磁珠，以去除任何不需要的蛋白質或蛋白質片段。

圖1. 用于免疫沉淀的 Dynabeads Protein A 磁珠與其他供應商的對比。進行Western blot來比較使用1）Sepharose離心柱、2）Sepharose混懸液、3）瓊脂糖混懸液和離心柱、4）樹脂離心柱、5）Dynabeads Protein A磁珠的方案時間和背景的差異（每種方法一式兩份）。Dynabeads Protein A磁珠的免疫沉淀具有低背景且至少節省14分鐘的時間。

可快速且簡便的進行手動 Dynabeads 分離
手動方案簡單且可在40分鐘內完成。首先，將靶蛋白的抗體與 Dynabeads 蛋白 A 在試管中孵育 10 分鐘。通過將試管置于 DynaMag 磁力架中并去除上清液，洗去過量抗體。然后，抗體包被磁珠可用于多種下游應用，包括 IP、Co-IP、染色質 IP (ChIP)、RNA IP (RIP)、小規模 IgG 純化和蛋白純化。由于 Dynabeads 的磁性，使用 DynaMag 磁力架可輕松收集結合材料。微珠上的重組蛋白 A 不含白蛋白結合位點，因此在程序中不會共純化白蛋白。IP 速度快，并且具有高得率、高重現性且非特異性結合極少，因此無需預清洗步驟。

自動 Dynabeads 分離有助于提高通量并縮短手動操作時間
如果您并行處理多份樣品，洗滌步驟數量和手動操作時間會與樣品數量成比例地增加。一次處理多個樣品時，移液管及其他手動操作獲得的結果往往不如自動化。為了更好地處理中等至高通量的樣品，減少手動操作時間并確保可重現性較高，我們開發了適用于 KingFisher Flex 和 KingFisher Duo Prime 儀器的 IP 方案。自動化方案復制人工方案，從而獲得同樣高的靶蛋白產率以及相同的低非特異性結合和高可重現性。無論您要處理 10 個還是 96 個樣品，IP 方案可在 40 分鐘內完成。’只需將試劑加載到孔板上，按下“開始”按鈕，到您準備好下游分析時，IP 即可完成。根據抗體和靶蛋白的豐度和/或特異性，可能需要進行一些優化（例如，孵育時間）。

?KingFisher Duo 儀器適用于低至中通量（1-12 份樣品/運行）
?KingFisher Flex 儀器適用于高通量（12-96 份樣品/運行）

溫和分離可盡可能減小對蛋白的物理應力
用于 Dynabeads 蛋白 A 的磁性分離技術快速且溫和，可盡可能減小對靶蛋白的物理應力。這允許分離和濃縮不穩定的復合物，否則在長時間孵育期間可能會被蛋白酶解離或被其破壞。保存天然蛋白構象和大蛋白復合物。

結合強度和結合能力
Dynabeads 蛋白質 A 可以分離大多數哺乳動物的免疫球蛋白（Ig）。捕獲的 Ig 量取決于起始樣品中 Ig 的濃度以及 Ig 的類型和來源。100µL Dynabeads 蛋白 A 將從每毫升含有 20–200µg IgG 的樣品中分離出約 25–30 µg 人 IgG。絕大部分位點與 Fc 結合，實現優化的 Ig 取向。抗體與微珠的光滑外表面結合，因而不會像與基于 Sepharose/瓊脂糖的微珠結合時一樣吸附在大孔中。所有抗體都可用于蛋白結合，因此，僅需加入少量抗體，靶蛋白得率依舊很高。光滑磁珠表面也實現了 Dynabeads 出色的低非特異性結合能力。