抗壞血酸過氧化物酶（APX）測試盒

 微量法 100T/96S

注意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義：

APX是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一，也是抗壞血酸代謝的關(guān)鍵酶之一。APX具有多種同功酶，分別定位于葉綠體、胞質(zhì)、線粒體、過氧化物和乙醛酸體，以及過氧化體和類囊體膜上。APX 催化H2O2氧化AsA，是植 AsA 的主要消耗者。APX的活性直接影響到AsA的含量，APX與AsA具有一定的負(fù)相關(guān)性。

測定原理：

APX 催化H2O2氧化AsA，通過測定AsA氧化速率，來計(jì)算得APX活性。

自備儀器用品：

低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、移液槍、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體120mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加3 mL蒸餾水充分溶解。

試劑三：液體3mL×1支，4℃保存。

粗酶液提取：

按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。13000g，4℃離心20min，取上清置冰上待測。

測定：

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長到290nm，用蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑一在25℃中預(yù)熱30min。

3.依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL上清液、140μL預(yù)熱的試劑一20μL試劑二和20μL試劑三，迅速混勻后在290nm測定10s和130s光吸收A1和A2，△A=A1-A2。

APX活性計(jì)算：

a.使用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下

(1)  按樣本蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義：每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol AsA 為1個酶活單位。

APX(nmol/min/mg prot) = △A÷(ε×d）×V反總×109÷(Cpr×V樣)÷T

=1786×△A÷ Cpr

（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義：每g組織每分鐘氧化1nmol AsA 為1個酶活單位。

APX(nmol/min/g 鮮重 ) = △A÷(ε×d）×V反總×109÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=1786×△A ÷W

ε：AsA在290nm處摩爾吸光系數(shù)為2.8×103 L/mol/cm；d：比色皿光徑（cm），1 cm；V反總：反應(yīng)體系總體積（L），200μL=2×10-4 L；109：1mol=1×109nmol；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒；W ：樣品質(zhì)量；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積（mL），20μL=0.02mL；V樣總：提取液體積，1 mL；T：催化反應(yīng)時間（min），2min。

b.使用96孔板測定的計(jì)算公式如下

(1)  按樣本蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義：每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol AsA 為1個酶活單位。

APX(nmol/min/mg prot) = △A÷(ε×d）×V反總×109÷(Cpr×V樣)÷T

=3571×△A÷ Cpr

（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義：每g組織每分鐘氧化1nmol AsA 為1個酶活單位。

APX(nmol/min/g 鮮重) = △A÷(ε×d）×V反總×109÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=3571×△A ÷W

ε：AsA在290nm處摩爾吸光系數(shù)為2.8×103 L/mol/cm；d：96孔板光徑（cm），0.5 cm；V反總：反應(yīng)體系總體積（L），200μL=2×10-4 L；109：1mol=1×109nmol；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒；W ：樣品質(zhì)量；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積（mL），20μL=0.02mL；V樣總：提取液體積，1 mL；T：催化反應(yīng)時間（min），2min。

注意事項(xiàng)：

配制好的試劑二4℃保存，并且3天內(nèi)使用完。

上海牧榮生物科技有限公司

1. 國內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理。

2. 國外試劑的訂購。可提供歐美實(shí)驗(yàn)室品牌的采購方案。

3. 提供加急物流處理，進(jìn)口貨物，最快交期1-2周。

4. 進(jìn)出口貨物代理服務(wù)。

5. 公司代理眾多有名生命科學(xué)領(lǐng)域的研究試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED BioSystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點(diǎn)合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

6. 質(zhì)量保證，所有產(chǎn)品都提供售后服務(wù)。付款方式靈活。公司堅(jiān)持“一站式”服務(wù)模式，為客戶全面解決實(shí)驗(yàn)、生產(chǎn)、開發(fā)需求。公司整合國際與國內(nèi)資源，加強(qiáng)網(wǎng)絡(luò)建設(shè)，提高公司內(nèi)部運(yùn)作效率，為客戶提供方便、快捷的服務(wù)。

7. 公司突出創(chuàng)新思維，提高工作效能，減低運(yùn)作成本，為客戶提供優(yōu)惠的價格。

抗壞血酸過氧化物酶（APX）測試盒