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化工儀器網>產品展廳>試劑標物>常用實驗試劑>普通試劑>AZ00003 All-in-One RT SuperMix for qPCR試劑

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AZ00003 All-in-One RT SuperMix for qPCR試劑

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上海創凌生物科技有限公司位于上海楊浦科技園區,由生物領域專業人士創辦,是一家集研發、銷售、實驗技術服務于一體的高科技企業。創凌堅持自己的經營理念,始終致力面向生命科學領域,從事生物醫學技術服務的學術輔助/科研外包,科研機構及生產企業所需的各類生產原料、試劑、儀器、耗材等的業務。勤奮踏實地整合產品資源與技術資源,為高校、科研院所的科研工作者以及生物制品生產企業提供一站式產品服務方案,幫助科研及企業單位縮短科研時間、節約科研成本、提升科研水平、增強企業市場競爭力。

自成立以來發展迅速,產品服務得到全國廣大生產企業、高校、科研院所、醫療系統及相關試劑公司的肯定,長期合作的客戶遍及全國各地。為更好地服務廣大用戶,不斷降低生產成本并向我們的客戶提供更強大的產品服務。創凌竭盡所能,與廣大生命科學工作者攜手迎接屬于生命科學的21世紀,共同創造新世紀的生物技術革命。


科研產品,生物試劑,儀器儀表,生物技術服務和生物耗材等

供貨周期 現貨 應用領域 醫療衛生,環保,食品/農產品,生物產業,制藥/生物制藥

儲運條件

-20℃

產品組成

All-in-One RT SuperMix for qPCR試劑

產品簡介

All-in-One RT SuperMix for qPCR(with dsDNase) 是一款高效、便捷、減少污染的高質量一鏈cDNA 合成試劑盒,包含M-MLV GIIIReverse Transcriptase 及其反應Buffer、RNA 酶抑制劑、dNTPs,Oligo(dT)20VN 和隨機引物等一鏈cDNA 合成所需的所有組分,僅需加入RNA 模板和水即可開始反應。All-in-One RT SuperMix for qPCR(withdsDNase) 作為升級后的一鏈cDNA 合成試劑盒,15 分鐘內最長可獲得12 kb cDNA,產物可用于qPCR、普通PCR 等實驗。從組織或細胞中提取的RNA 往往殘留基因組DNA 污染,如果反轉錄前不做去除處理,下游進行qPCR 反應時基因組DNA 與cDNA會同時進行擴增,尤其是引物設計在同一外顯子上時,影響定量準確性。本試劑盒所采用的dsDNase 能夠特異性消化雙鏈DNA 或DNARNA雜合雙鏈中的DNA,并且具有熱敏感性,在逆轉錄反應溫度下即可快速不可逆地失活。與傳統使DNase I 去除基因組DNA 污染的方法相比,dsDNase 無需額外加入EDTA 進行失活,不僅節省實驗時間,而且降低了對逆轉錄反應的抑制。可依據基因組DNA 污染嚴重程度,選擇去基因組DNA 污染與反轉錄分開進行,或者去基因組DNA 污染與反轉錄一步進行的操作方法。

使用方法

針對基因組DNA 含量低的RNA 樣品(推薦方案)

All-in-One RT SuperMix for qPCR試劑

① 于冰上配制如下反應體系:

a. 推薦使用試劑盒提取的高質量RNA 作為模板。

② 輕柔吸打混勻,瞬離;

③ 37℃溫育2 min,以去除基因組DNA 污染;

④ 55℃溫育15 min;

⑤ 反應結束后,85℃溫育2 min 以終止反應;

⑥ 迅速將獲得的cDNA 置于冰上,用于后續實驗;或立即保存于-20℃。

針對基因組DNA 含量高RNA 樣品

1. 基因組DNA 污染去除

① 于冰上配制如下反應體系:

a. 推薦采用試劑盒提取的RNA 作為模板。

② 輕柔吸打混勻,瞬離;

③ 37℃溫育2 min,以去除基因組DNA 污染;

注:若RNA 中基因組DNA 污染嚴重,可適當延長37℃溫育時間至5 min。

④ 65℃溫育2 min,使dsDNase 失活,然后置于冰上。

2. 第一鏈cDNA 合成

① 于冰上配制如下反應體系:

② 輕柔吸打混勻,瞬離;

③ 50℃溫育15 min;

注:若目標RNA 不含Poly(A) 結構,可預先25℃溫育10 min。

④ 反應結束后,85℃溫育2 min,以終止反應;

⑤ 將獲得的cDNA 溶液置于冰上,用于后續實驗。

注:cDNA 溶液置于-20℃儲存,建議不超過1 周;置于-80℃可長期儲存。

注意事項

預混液中已經包含Oligo(dT)20VN 和隨機引物,不僅適用于包含Poly(A) 結構的真核生物mRNA,也適用于不含Poly(A) 結構的原核生物RNA、真核生物rRNA 和tRNA 等模板,但不適用于miRNA 等小RNA 模板。

美國Azaood公司成立于2004年,是一家開發和生產用于生命科學研究、診斷和生物技術應用的高質量純化酶、蛋白質、核酸和細胞分離試劑盒、胎牛血清的;Azood公司是通過了ISO9001認證的主要制造商,可以滿足從研究到大規模批量生物加工和OEM應用與要求的公司。





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