產品描述

TG1來源于E. coli K-12菌株，是目前生長速度較快的克隆用大腸桿菌菌株，在平板上37 ℃培養時，7 h可見克隆。主要的噬菌體展示用菌株，同時也可用于普通質粒的構建。lacIqZΔM15的存在使其可以用于藍白斑篩選等實驗；但不含核酸酶endA1突變，體內核酸酶含量較高，提取質粒時推薦使用質粒提取試劑盒中配備的去蛋白液以去除菌體內大量的核酸酶。經pUC19質粒轉化檢測，TG1感受態細胞的轉化效率可達108 cfu/μg DNA。

產品優勢

? 高轉化效率：>1x108 cfu/µg pUC19 DNA
? 適合于作為主要的噬菌體展示用菌株，同時也可用于普通質粒的構建

產品組分

基因型：[F′traD36 proAB lacIq ZΔM15] supE thi-1 Δ(lac-proAB) Δ(mcrB-hsdSM)5 (rK– mK– )

產品應用

TG1感受態適合于作為主要的噬菌體展示用菌株，同時也可用于普通質粒的構建。

實驗流程

1. 解凍感受態細胞：從-80℃取感受態細胞，放置在冰浴或冰水浴中融化，約5-10 min，放置時間過長會影響轉化效率。

2. DNA樣品的轉化：每100 μL感受態加入待轉化DNA樣品(例如質粒、連接產物或重組產物等)約10 μL，然后輕輕彈擊管底約2-3次，立即冰上靜置孵育30 min。

? 加入待轉化DNA樣品體積通常不宜超過感受態細胞體積的10%。
? 加入待轉化DNA樣品后應輕柔操作，避免使用移液槍吹打混勻。
? 如果用于質粒的轉化擴增，冰浴靜置約10 min后可以直接涂板并培養過夜；如果用于連接產物或重組產物的轉化，建議冰浴靜置30分鐘并嚴格執行后續的熱激處理和復蘇培養等步驟，以提高轉化效率。

3. 熱激處理：將冰浴后的離心管快速置于42℃水浴中，靜置熱激90 s。隨后立即轉移至冰水浴中靜置2-3 min以快速冷卻。

? 熱激及轉移至冰浴過程中請勿晃動離心管。

4. 復蘇培養：加入900 μL 37℃預熱的LB或SOC培養基，顛倒數次混勻，37℃搖床約220 rpm復蘇培養45 min。

5. 收菌涂板：如果用于質粒的轉化擴增，建議直接取50-100 μL進行涂板即可；如果用于連接產物或重組產物的轉化，建議先5000 g，1 min室溫離心沉淀細菌，吸除約900-950 μL上清，然后用剩余的約50-100 μL菌液重懸，涂布到含相應抗生素的LB平板上。

6. 過夜培養：將平板倒置放于37℃培養箱培養過夜。

? 培養前需要將平板在超凈臺中稍微晾至無明顯水漬，有利于形成單克隆。

保存條件

-80℃保存；請勿將本品置于-20℃或者液氮中保存。

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