產品描述

Stable高轉化效率菌株是逆轉錄病毒/慢病毒載體系統推薦使用的菌株，特別適合于慢病毒或具有末端重復序列DNA片段的克隆。基因組含有recA1和relA1突變，可有效抑制長片段末端重復區的重組，降低錯誤重組的概率；同時含有核酸酶endA1突變，避免了提取質粒過程中核酸酶的污染，大大提高了高純度病毒質粒的產量和質量。lacZΔM15的存在使Stable可用于藍、白斑篩選，此菌株具有四環素和lianmeisu抗性。經pUC19質粒轉化檢測，Stable感受態細胞的轉化效率可達108 cfu/μg DNA。

產品優勢

? 高轉化效率：>1x108 cfu/µg pUC19 DNA
? 適合于各種逆轉錄病毒/慢病毒載體或具有末端重復序列DNA片段的克隆

產品組分

基因型：F' proAB lacIq ?(lacZ)M15 zzf::Tn10 (TetR) ?(ara-leu)7697 araD139 fhuA ?lacX74 galK16 galE15 e14- φ80 ?lacZ?M15 recA1 relA1 endA1 nupG rpsL (StrR) rph spoT1 ?(mrr-hsdRMS -mcrBC)

產品應用

Stable感受態適合于各種逆轉錄病毒/慢病毒載體或具有末端重復序列DNA片段的克隆。

實驗流程

1. 解凍感受態細胞：從-80℃取感受態細胞，放置在冰浴或冰水浴中融化，約5-10 min，放置時間過長會影響轉化效率。

2. DNA樣品的轉化：每100 μL感受態加入待轉化DNA樣品(例如質粒、連接產物或重組產物等)約10 μL，然后輕輕彈擊管底約2-3次，立即冰上靜置孵育30 min。

? 加入待轉化DNA樣品體積通常不宜超過感受態細胞體積的10%。
? 加入待轉化DNA樣品后應輕柔操作，避免使用移液槍吹打混勻。
? 如果用于質粒的轉化擴增，冰浴靜置約10 min后可以直接涂板并培養過夜；如果用于連接產物或重組產物的轉化，建議冰浴靜置30分鐘并嚴格執行后續的熱激處理和復蘇培養等步驟，以提高轉化效率。

3. 熱激處理：將冰浴后的離心管快速置于42℃水浴中，靜置熱激90 s。隨后立即轉移至冰水浴中靜置2-3 min以快速冷卻。

? 熱激及轉移至冰浴過程中請勿晃動離心管。

4. 復蘇培養：加入900 μL 37℃預熱的LB或SOC培養基，顛倒數次混勻，37℃搖床約220 rpm復蘇培養45 min。

5. 收菌涂板：如果用于質粒的轉化擴增，建議直接取50-100 μL進行涂板即可；如果用于連接產物或重組產物的轉化，建議先5000 g，1 min室溫離心沉淀細菌，吸除約900-950 μL上清，然后用剩余的約50-100 μL菌液重懸，涂布到含相應抗生素的LB平板上。

6. 過夜培養：將平板倒置放于37℃培養箱培養過夜。

? 培養前需要將平板在超凈臺中稍微晾至無明顯水漬，有利于形成單克隆。

保存條件

-80℃保存；請勿將本品置于-20℃或者液氮中保存。

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