產(chǎn)品描述

OmniMAX 2 T1來(lái)源于大腸桿菌K12，經(jīng)過(guò)改良后適用于所有的克隆應(yīng)用，包括Gateway技術(shù)。此外，OmniMax 2 T1還能有效轉(zhuǎn)化高度甲基化的DNA。由于該菌株攜帶tonA基因突變，因此對(duì)T1和T5噬菌體感染具有抗性。因?yàn)镺mniMax 2 T1感受態(tài)缺少大腸桿菌K12 限制性系統(tǒng) (mcrA Δ(mrr hsdRMS-mcrBC))，所以它們還能夠高效轉(zhuǎn)化高度甲基化的DNA。經(jīng)pUC19質(zhì)粒轉(zhuǎn)化檢測(cè)，OmniMax 2 T1感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率可達(dá)109 cfu/μg DNA以上。

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

? 高轉(zhuǎn)化效率：>1x109 cfu/µg pUC19 DNA
? 適合于所有克隆應(yīng)用

產(chǎn)品組分

基因型：F′ proAB+ lacIq lacZΔM15 Tn10 (TetR) Δ(ccdAB) mcrA Δ(mrr hsdRMS-mcrBC) φ80(lacZ)ΔM15 Δ(lacZYA-argF) U169 endA1 recA1 supE44 thi-1 gyrA96 relA1 tonA panD

產(chǎn)品應(yīng)用

OmniMAX 2 T1適用于所有的克隆應(yīng)用。

實(shí)驗(yàn)流程

1. 解凍感受態(tài)細(xì)胞：從-80℃取感受態(tài)細(xì)胞，放置在冰浴或冰水浴中融化，約5-10 min，放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)影響轉(zhuǎn)化效率。

2. DNA樣品的轉(zhuǎn)化：每100 μL感受態(tài)加入待轉(zhuǎn)化DNA樣品(例如質(zhì)粒、連接產(chǎn)物或重組產(chǎn)物等)約10 μL，然后輕輕彈擊管底約2-3次，立即冰上靜置孵育30 min。

? 加入待轉(zhuǎn)化DNA樣品體積通常不宜超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積的10%。
? 加入待轉(zhuǎn)化DNA樣品后應(yīng)輕柔操作，避免使用移液槍吹打混勻。
? 如果用于質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化擴(kuò)增，冰浴靜置約10 min后可以直接涂板并培養(yǎng)過(guò)夜；如果用于連接產(chǎn)物或重組產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化，建議冰浴靜置30分鐘并嚴(yán)格執(zhí)行后續(xù)的熱激處理和復(fù)蘇培養(yǎng)等步驟，以提高轉(zhuǎn)化效率。

3. 熱激處理：將冰浴后的離心管快速置于42℃水浴中，靜置熱激90 s。隨后立即轉(zhuǎn)移至冰水浴中靜置2-3 min以快速冷卻。

? 熱激及轉(zhuǎn)移至冰浴過(guò)程中請(qǐng)勿晃動(dòng)離心管。

4. 復(fù)蘇培養(yǎng)：加入900 μL 37℃預(yù)熱的LB或SOC培養(yǎng)基，顛倒數(shù)次混勻，37℃搖床約220 rpm復(fù)蘇培養(yǎng)45 min。

5. 收菌涂板：如果用于質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化擴(kuò)增，建議直接取50-100 μL進(jìn)行涂板即可；如果用于連接產(chǎn)物或重組產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化，建議先5000 g，1 min室溫離心沉淀細(xì)菌，吸除約900-950 μL上清，然后用剩余的約50-100 μL菌液重懸，涂布到含相應(yīng)抗生素的LB平板上。

6. 過(guò)夜培養(yǎng)：將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過(guò)夜。

? 培養(yǎng)前需要將平板在超凈臺(tái)中稍微晾至無(wú)明顯水漬，有利于形成單克隆。

保存條件

-80℃保存；請(qǐng)勿將本品置于-20℃或者液氮中保存。

相關(guān)參數(shù)