抗體酵母展示技術服務
- 公司名稱 泰克生物科技（天津）有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號
- 產地
- 廠商性質 生產廠家
- 更新時間 2023/10/16 17:41:51
- 訪問次數 357
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泰克生物著力于為客戶提供高質量，且具性價比的抗體藥物前期發現技術服務。我們在藥物抗體發現方面擁有10年的項目開發經驗和心得，積累了充足的抗體定制和重組蛋白生產經驗?；诮湍阁w展示技術（Yeast Display Technology）平臺的服務，泰克生物能夠為客戶提供一系列包括但不限于兔源、鼠源、羊源、駝源等不同物種的單克隆抗體制備服務，及其配套的完整可追溯性文件體系。
酵母抗體展示技術（Yeast Display Technology）是指用抗體序列可變區與凝集素Aga2p融合表達，Aga2p蛋白亞基通過兩個二硫鍵與固定在酵母細胞壁上的Aga1p 蛋白亞基結合，結合流式分選技術，將靶向抗原的特異性抗體給篩選出來。
█ 酵母展示抗體文庫構建服務
泰克生物可為客戶提供來自駝源VHH納米抗體庫，以及其他物種scFv形式抗體的酵母展示文庫構建及篩選服務。VHH納米抗體庫，又稱為駝源重鏈抗體文庫，抗體分子量大小為15kDa，是駝源動物產生的一種抗體。酵母抗體文庫展示體系受限于自身物理特性限制，物理庫容滴度一般<107，因此主要應用于客戶對項目庫容要求不高，動物免疫后PBMC細胞經過二次分選以及避免漏掉二硫鍵形成的抗體發現項目。同時酵母展示文庫相對噬菌體展示文庫技術而言，前者在微量抗體表達后抗體活性層面相較于后者要高，得益此基礎，在流式篩選時就能區分抗體的親和力高低。
目前被廣泛應用于CAR-T/CAR-NK治療性抗體，主要以駝源VHH抗體（又被稱為納米抗體）發現為主，VHH/scFv抗體酵母展示發現路徑如圖1所示：
圖1基于酵母技術平臺的VHH/scFv抗體發現服務
█ 抗體酵母展示技術服務內容和周期
步驟 | 服務內容 | QC標準 | 周期 |
Step1:蛋白表達 | (1) 密碼子優化+基因模板合成+表達載體構建； (2) 質粒抽提+轉染（哺乳表達系統）目的蛋白檢測（WB，SDS-PAGE）； (3) 蛋白表達放大+蛋白親和純化； | 交付：表達載體，克隆甘油菌，重組蛋白3-3.5mg，純度>85%，標準實驗報告
| 4-6周 |
Step2:動物免疫 | (1) 動物免疫4次，加強免疫一針，共計免疫5針； (2) 免疫前采集陰性血清，第4針采血進行ELISA檢測血清效價； (3) 若第4針血清抗體效價（蛋白抗原>105；多肽抗原>104）滿足要求，則采血前7天再次加強免疫1針，如不滿足要求，則繼續常規免疫； (4) 效價合格，采血分離單核細胞； | 動物：背景清晰（年齡，性別，防疫情況）； 免疫：蛋白抗原>105；多肽抗原>104； 采血：數量100ml以上； PBMC細胞：>105/vial
| 8-10周 |
Step3:模板cDNA制備 | (1) PBMC總RNA提?。≧NA提取試劑盒） (2) 高保真RT-PCR制備cDNA（反轉錄試劑盒） | cDNA：反轉后>1ug/ul，膠圖分布均勻； cDNA模板總量>150ug； | 1 天 |
Step4:抗體酵母展示文庫構建 | (1) 以cDNA為模板，兩輪PCR擴增VHH基因 酵母表達質粒構建與轉化： VHH基因拼接酵母展示載體，電擊轉化酵母宿主菌，構建抗體庫，電擊次數不低于10次 鑒定：隨機挑選24個克隆，PCR鑒定陽性率+PCR鑒定多樣性+插入率 | 文庫陽性率：>90%； 文庫插入性率：>90%； 庫容：>106 | 1-2周 |
Step5:文庫篩選（磁珠+Facs） | (1) 磁珠分選； (2) FACS分選（免疫雙標分選）； (3) 鋪板+陽性克隆菌培養+抗體基因測序；（>20個，多達96個）； | 陽性標準：雙陽性菌株； VHH篩選標準：CDR氨基酸序列不同 | 2-3周 |
Step6:抗體驗證（體外驗證） | (1) 將獲得的抗體序列構建合適的表達載體進行表達+親和純化+抗體蛋白定量； (2) Elisa驗證抗體與抗原結合，進行下游驗證（交付EC50數據）; (3) BLI法驗證抗體親和力； (4) 細胞功能驗證：流式驗證； (5) 驗證細胞系（抗原受體過表達細胞系）； | 交付：表達載體，克隆菌株，表達菌株，重組抗體蛋白1mg，純度90%； 快速親和力測定結果； | 4-6周 |
█ 抗體酵母展示技術平臺抗體酵母展示技術平臺抗體酵母展示技術服務優勢
?物種適應性廣泛：人，鼠，兔，羊，羊駝，駱駝，魚等物種的單抗開發均兼容
?技術平臺成熟：提供的1級免疫文庫的建庫庫容為106-107；插入率均滿足>95%，篩選獲得的抗體親和力普遍處于nM- pM級別
?開發周期短：獲得PBMC后，建庫到篩選獲得抗體序列，3-4周
?產品交付標準高：針對免疫庫，交付免疫前后血清，抗體展示文庫，酵母表達菌株，抗體序列
?實驗記錄可追溯：QC質控標準（含RNA提取，cDNA制備等），中英文實驗報告，手寫實驗記錄本
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