一、細胞基本屬性

組織來源：外周血

種屬來源：人

細胞簡介：B淋巴細胞的祖細胞存在于胎肝的造血細胞島中 ，此后B淋巴細胞的產生和分 化場所逐漸被骨髓所代替。成熟的B細胞主要定居于淋巴結皮質淺層的淋巴小 結和脾臟的紅髓和白髓的淋巴小結內。  B細胞在抗原刺激下可分化為漿細胞 ， 漿細胞可合成和分泌抗體  (免疫球蛋白)  ，主要執行機體的體液免疫。

B細胞在骨髓內分化各階段的主要變化為免疫球蛋白基因的重排和膜表面標志 的表達。  B細胞在發育分化過程中 ，同樣也經歷選擇作用 ，以除去非功能性基 因重排B細胞和自身反應性B細胞 ，形成周圍成熟的B細胞庫。  B細胞表面有多 種膜表面分子 ，識別抗原、與免疫細胞和免疫分子相互作用 ，也是分離和鑒  別B細胞的重要依據。  B細胞表面分子主要有白細胞分化抗原、  MHC以及多種 膜表面受體。

培養基：原代B淋巴細胞培養體系

換液頻率:每2-3天換液一次

生長特性：懸浮培養

傳代特性：根據細胞特性傳代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養條件：氣相：空氣 ，95%；  CO2 ，  5%

二、細胞培養狀態

發貨時發送細胞電子版照片

三、使用方法

人B淋巴細胞是一種懸浮培養細胞，細胞形態呈，在技術部標準操作流程下，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。

客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。

1. 取出T25細胞培養瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養瓶傳代，然后補充新鮮的培養基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養；

4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內加入5ml培養基終止消化；

3)經1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養基重懸沉淀，接種于新的培養瓶內；

4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基(37℃預熱)。

5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。

四、注意事項

1. 培養基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細胞培養過程中，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養過程中，消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和技術部溝通；由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

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