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化工儀器網(wǎng)>產(chǎn)品展廳>試劑標(biāo)物>常用實驗試劑>普通試劑>05-200-1A MSC NutriStem® XF Medium無血清培養(yǎng)基

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05-200-1A MSC NutriStem® XF Medium無血清培養(yǎng)基

具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 公司名稱 上海昊則生物科技有限公司
  • 品牌 其他品牌
  • 型號 05-200-1A
  • 產(chǎn)地
  • 廠商性質(zhì) 代理商
  • 更新時間 2023/6/25 16:46:28
  • 訪問次數(shù) 2057
產(chǎn)品標(biāo)簽

05-200-1A

聯(lián)系我們時請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,謝謝!


上海昊則生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域的高科技公司。公司成立于2006年,主要從事分子生物學(xué),細(xì)胞生物學(xué),免疫學(xué),蛋白組學(xué)等實驗研究的相關(guān)試劑,耗材以及儀器的銷售,目前是以色列BI公司*中國區(qū)一級經(jīng)銷商;荷蘭TICO Europe加拿大Stemcell公司*經(jīng)銷商,美國豪精生物中國區(qū)經(jīng)銷商,澳大利亞Moregate公司中國區(qū)*經(jīng)銷商,同時也是MILLIPORE,SIGMA,SANTA CRUZ,CST,ABCAM,BD PMG等品牌的合作伙伴。

待定

供貨周期 現(xiàn)貨 應(yīng)用領(lǐng)域 食品/農(nóng)產(chǎn)品,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥,綜合

 

間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基

MSC NutriStem® XF Medium

 

以色列BI(Sartorius)MSC無血清培養(yǎng)基產(chǎn)品說明書:

一、目的:利用間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)分離臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞。

二、材料:新生兒臍帶

三、主要儀器:醫(yī)用手術(shù)器械,生物安全柜,CO2培養(yǎng)箱,6孔培養(yǎng)板,T25培養(yǎng)瓶

四、試劑:

1 MSC NutriStem® XF Medium

用途

品牌

貨號

名稱

規(guī)格

保存條件

MSC培養(yǎng)基

Biological Industries

05-200-1A

MSC NutriStem® XF Basal Medium

MSC無血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基

500ml

4℃

Biological Industries

05-201-1U

MSC NutriStem® XF Supplement

MSC無血清添加劑

3ml

-20℃

細(xì)胞貼壁

Biological Industries

05-752-1H

MSC Attachment solution (100X)

MSC貼壁試劑

1 ml

4℃

 

Biological Industries
PLTGOLD010R

PLTGold® Human Platelet Lysate

血小板裂解物**
10ml -20

**已知血小板裂解物含有大量的外泌體,用戶可依照實驗?zāi)康倪x用合適的貼壁試劑。

細(xì)胞傳代

Biological

Industries

03-079-1A

Recombinant Trypsin-EDTA Solution

-EDTA

500ml

RT

Biological Industries

03-048-1C

Soybean Trypsin Inhibitor (50X)

大豆抑制劑

20 ml

-20℃

Biological Industries

C3590-0500

DPBS (w/o Ca & Mg)

500 ml

RT

DPBS緩沖液

輔助試劑

Biological Industries

05-713-1B

NutriFreez®  D10 Cryopreservation Medium

100 ml

4℃

D10 凍存液

Biological Industries

C3420-0100

Penicillin-Streptomycin Solution (100X)青鏈雙抗

100ml

-20℃

  VivaCell C3501-0010

MSC ACF Tissue Digestive Mix

高效原代干細(xì)胞分離液
100m -20

五、實驗前準(zhǔn)備:

5.1培養(yǎng)基的準(zhǔn)備

5.1.1凍存的MSC NutriStem® XF Supplement在室溫或2-8℃解凍,避免反復(fù)凍融。

5.1.2配制:MSC NutriStem® XF Basal Medium(培養(yǎng)基):MSC NutriStem® XF Supplement(添加物):青鏈雙抗=500ml:3ml:5ml,4℃保存,2周內(nèi)使用。

注1:雙抗非必須,建議原代(P0)時使用。

注2:培養(yǎng)基含L-Glutamine,貯藏時避免長期照光。

 

5.2包被培養(yǎng)皿

或跳過此步驟,直接加2%血小板裂解物,促進(jìn)MSC細(xì)胞貼壁與生長。

如果使用05-752-1H,參考如下步驟:

5.2.1使用DPBS溶液(BI, Cat# 02-023-1A),將MSC貼壁試劑稀釋100倍(1:100)。

5.2.2參照表3,加入適量的1X MSC貼壁試劑涂層培養(yǎng)皿或板。

表3  涂層過程中貼壁試劑建議使用量(05-752-1)

 

培養(yǎng)器皿

表面積cm2/孔或瓶

1X MSC貼壁試劑使用體積

96孔板

0.34

0.05~0.1 ml

24孔板

1.9

0.2~0.4 ml

12孔板

3.9

0.4~0.8 ml

6孔板/ 35 cm培養(yǎng)皿

9.6

1~2 ml

T25瓶/ 60 cm培養(yǎng)皿

25

2.5~5 ml

T75瓶

75

7.5~15 ml

 

注1:涂層的培養(yǎng)皿需在無菌條件下2℃-8℃儲存,需在一周內(nèi)使用。(標(biāo)示紅色為原廠建議使用量,經(jīng)過實驗測試后可減半使用)

注2:包被期間, 注意包被液不可以干掉!

 

5.2.3輕輕搖動培養(yǎng)皿,確認(rèn)貼壁試劑均勻分布在培養(yǎng)皿表面后,用封口膜包裹涂層的培養(yǎng)皿。

5.2.4在2-8℃孵育過夜;或者在CO2培養(yǎng)箱,37℃,至少孵育30分鐘。

5.2.5接種前, 吸除貼壁試劑,再用DPBS輕輕沖洗培養(yǎng)皿,即可接種細(xì)胞。

 

如果使用05-760-1-15,參考如下步驟:
5.2.1使用生理鹽水,將NutriCoat™ 促貼壁試劑稀釋500倍(1:500)。
5.2.2參照表4,加入適量的1X NutriCoat™ 促貼壁試劑涂層培養(yǎng)皿或板。

表4  涂層過程中貼壁試劑建議使用量(05-760-1-15)

培養(yǎng)器皿

表面積cm2/孔或瓶

1X NutriCoat™ 促貼壁試劑使用體積

96孔板

0.34

0.1 ml

24孔板

1.9

0.5 ml

12孔板

3.9

1 ml

6孔板

9.6

2.5 ml

T25瓶

25

6.5 ml

T75瓶

75

19 ml


注1:涂層的培養(yǎng)皿需在無菌條件下2℃-8℃儲存,需在一周內(nèi)使用。

注2:包被期間,注意包被液不可以干掉!

5.2.3輕輕搖動培養(yǎng)皿,確認(rèn)貼壁試劑均勻分布在培養(yǎng)皿表面后,用封口膜包裹涂層的培養(yǎng)皿。
5.2.4在2-8℃孵育過夜;或者在CO2培養(yǎng)箱,37℃,至少孵育1小時。

5.2.5接種前, 吸除貼壁試劑,用DPBS輕輕沖洗培養(yǎng)皿(或不需要清洗),即可接種細(xì)胞。

 

5.3制備1X大豆抑制劑

5.3.1使用無菌的DPBS,將50X大豆抑制劑(03-048-1C)稀釋成1X。

注1:抑制重組消化建議方法:第一種使用大豆抑制劑;第二種使用PBS/DPBS清洗(2倍重組量)吹打, 離心去上清;第三種使用維持培養(yǎng)基抑制。

 

六、使用范例:

6.1 UC-MSC原代培養(yǎng) (組織塊法)

6.1.1無菌條件下取新鮮臍帶,用DPBS漂洗凈血跡

注1: 一般臍帶取得非無菌環(huán)境,可以稍微用75%酒精潤洗。

6.1.2置10cm 培養(yǎng)皿中,剪成1~2cm臍段,剔除血管,用DPBS洗凈血跡,再剪成1mm3組織塊。(圖 1)

6.1.3用無菌滴管吸取少量細(xì)小組織塊均勻散布在 6 孔板 2 個孔中。

6.1.4 37℃,5%CO2培養(yǎng)箱孵育 30min,以使組織塊粘貼在培養(yǎng)皿壁上。

6.1.5 向每孔滴加0.8ml 培養(yǎng)基 (注意沿孔壁小心滴加,勿使沖動組織塊)。

6.1.6 37℃,5% CO2 培養(yǎng)箱孵育過夜,次日 (D1) 每孔再補(bǔ)加1ml 培養(yǎng)基。

6.1.7 37℃,5% CO繼續(xù)培養(yǎng),5天 (D6) 后半量換液 (此時一般看不到細(xì)胞,但最快3天就可看到細(xì)胞從組織邊沿爬出)。

6.1.8再過5天后半量換液 (此時一般會有細(xì)胞爬出,但最晚可到14天會出現(xiàn)細(xì)胞從組織邊沿爬出) (圖2、圖3)。

6.1.9每2天換一次培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)2~4天,待細(xì)胞融合度(Confluency)達(dá)到約80%后傳代培養(yǎng)(圖4)。

注1組織塊培養(yǎng)的關(guān)鍵是要保障組織塊始終貼壁,換液動作要盡可能輕微,避免沖動組織塊。培養(yǎng)基加量不能太多,以免組織塊漂浮。

注2:為增加成功率,從原代分離臍帶和脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞,培養(yǎng)基可加2.0 % PLTGold® 血小板裂解物。

 

6.UC-MSC原代培養(yǎng) (消化法)

MSC NutriStem® 無血清培養(yǎng)基也能有效地培養(yǎng)消化法取得的原代細(xì)胞,操做方式如下:

6.2.1 將臍帶用DPBS漂洗干凈,剪成1-50px,后剔除血管。

注1:一般臍帶取得非無菌環(huán)境,可以稍微用75%酒精潤洗。

6.2.2剪成3-5mm3后,移入50ml離心管,再加入的分離液。

注1:一條長度10公分的臍帶建議加入10ml的分離液;或者組織塊 : 分離液(vol)= 1:1。

注2: 視情況而定,可自行在分離液中添加1%青鏈雙抗(BI, Cat# 03-031-1B)。

6.2.3把50ml離心管橫放在37度細(xì)胞培養(yǎng)箱,過夜反應(yīng)(16小時)。

注1:若總反應(yīng)體積較大,也可持續(xù)旋轉(zhuǎn)混合。

6.2.4加入和分離液等體積的0.05?TA(BI, Cat#03-015-1B)終止反應(yīng)后,1500 xg離心5分鐘,去除上清。

注1:溶液比較濃稠,小心不要影響下層的細(xì)胞;建議留下5ml左右的溶液。

注2: 若是脂肪組織,沒有粘稠的情形,以常規(guī)的200-300 xg離心即可。

注3:沒有EDTA, 可使用無鈣鎂DPBS取代;此時建議后面步驟6多重復(fù)2-3次,以確實去除酵素。

6.2.5以和分離液等體積的無鈣鎂DPBS重懸細(xì)胞后,500 xg離心5分鐘,去除上清。

6.2.6再次以和分離液等體積的無鈣鎂DPBS重懸細(xì)胞后,250 xg離心5分鐘,去除上清。

6.2.7用適量的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后,即可按常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)方法接種P0代細(xì)胞培養(yǎng)。

注1:消化后的原代細(xì)胞,建議培養(yǎng)時接種密度提高到10,000/cm2以上;傳代后即可按常規(guī)的接種密度培養(yǎng)。

 

6.3 UC-MSC傳代培養(yǎng)與凍存

6.3.1待細(xì)胞融和度達(dá)到約80%后進(jìn)行傳代(細(xì)胞不能太密集,否則容易分化),吸棄傳代板孔中的培養(yǎng)基,每孔加適量DPBS輕輕沖洗1次。

6.3.2根據(jù)培養(yǎng)皿適量加入重-EDTA(貨號:03-079-1A,T25建議使用1ml),在37℃,5% CO2培養(yǎng)箱作用3~5 min(可輕拍培養(yǎng)瓶幫助細(xì)胞脫落)。

6.3.3顯微鏡下觀察細(xì)胞脫落后,使用5-10ml稀釋大豆抑制劑(SBTI, 貨號:03-048-1,1X),1000rpm離心3~5min。

6.3.4謹(jǐn)慎吸出上清,細(xì)胞團(tuán)塊用適當(dāng)體積的培養(yǎng)基懸浮后,混勻細(xì)胞懸液。

6.3.5按照所需的比例進(jìn)行傳代或按照5000-6000cells/cm2的細(xì)胞密度將細(xì)胞接種至培養(yǎng)器皿中,放入37℃, 5% CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

6.3.6每2-3天更換一次培養(yǎng)基,待細(xì)胞融合度達(dá)到80%左右時,參照操作步驟6.3.1~6.3.5做細(xì)胞傳代;或者參照操作步驟6.3.1~6.3.3收獲細(xì)胞凍存。

6.3.7細(xì)胞凍存:將細(xì)胞團(tuán)塊懸浮于適量 (0.5~1×106cells/ml) D10無血清 凍存液(貨號:05-713-1)中,裝入凍存管,2~8℃冰箱放置30min,-80℃冰箱放置 24h,轉(zhuǎn)入液氮罐凍存。

注1:本方法僅供參考,用戶可根據(jù)自身經(jīng)驗做合理調(diào)整。

附圖:(如下是組織塊法,建議客戶可以嘗試消化法)

        

 圖1剔除臍帶3根動靜脈血管            圖2細(xì)胞從組織塊邊沿爬出

         

圖3細(xì)胞快速增殖                            圖4傳代時機(jī)成熟

 



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