動物細胞/組織高質純化線粒體分離試劑盒主要用途：動物細胞/組織高質純化線粒體分離試劑是一種旨在從動物細胞或組織中分離出活性完整而高度純化的線粒體細胞器的權wei而經典的技術方法。該技術由大師級科學家精心研制、成功實驗證明的。適合于動物軟組織（肝或腦組織）和培養細胞的活性線粒體的制備。其制備物產量高，活性保證，純度可達99％。可以被用于線粒體酶活性、細胞凋亡、信號傳遞、能量代謝、蛋白組學和病理生理學等的研究。產品不含污染性蛋白水解酶和核酶，即到即用，性能穩定，分離產量和純度堪稱同類產品最佳。

動物細胞/組織高質純化線粒體分離試劑盒技術背景:線粒體細胞器的分離是現代細胞生物學研究的zui常用的手段之一。從任何組織或細胞分離線粒體的技術方法基本上采用：第一，通過機械或化學方法破裂細胞；第二，通過低速差速離心去除殘渣碎屑和巨大細胞器；第三，通過高速差速離心獲得線粒體；甚至，第四，可以通過等密度離心獲得純度更高的線粒體。 

產品內容

清理液（Reagent A）          毫升

裂解液（Reagent B）          毫升

凈化液（Reagent C）          毫升

強化液（Reagent D）          毫升

保存液（Reagent E）          毫升

活性液（Reagent F）          微升

高純液（Reagent G）          毫升

產品說明書              1份

保存方式

保存凈化液（Reagent C）和活性液（Reagent F）在－20℃冰箱里，避免反復凍融；其余的保存在4℃冰箱里；高純液（Reagent G），避免光照；裂解液（Reagent B）和保存液（Reagent E）嚴格無菌操作；有效保證6月

用戶自備

HANK平衡鹽緩沖溶液（G&VS12028）或PBS緩沖溶液（G&VS12033）：用于清理細胞

硬組織處理液（Reagent G）：用于促進硬組織表面溶解

胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（G&VS12024）：用于細胞脫離

*細胞培養液（G&VS12052）：用于中和胰蛋白酶的細胞培養基

15毫升錐形離心管：用于線粒體初步制備物的存放

50毫升錐形離心管：用于細胞或組織收集后離心或清洗

1.5毫升離心管：用于保存線粒體

4℃臺式離心機：用于沉淀細胞

4℃超速離心機：用于分離細胞器成分和高質純化

DOUNCE勻漿器：用于裂解細胞

實驗步驟

一、動物軟組織線粒體分離（組織勻漿法）

實驗開始前，將試劑盒里的凈化液（Reagent C）和活性液（Reagent F）凍融，然后移取xx微升活性液（Reagent F）、 xx 凈化液（Reagent C）和xx毫升的裂解液（Reagent B）到15毫升錐形離心管里，混勻后，標記為裂解工作液，放進冰槽里備用。然后進行下列操作。

1． 手術取出動物組織，并秤重以確定組織重量（注意：實驗前最好使動物空腹12至24小時） 

2． （選擇步驟）放進預冷的50毫升錐形離心管

3． （選擇步驟）加入適量的（1克組織需要xx毫升）清理液（Reagent A）清洗1次

4． 即刻用刀片切碎組織

5． 放進一個預冷的15毫升錐形離心管

6． 加入預冷的xx毫升裂解工作液

7． 渦旋震蕩5秒，充分混勻

8． 即刻放入預冷的DOUNCE勻漿器

9． 在冰槽里用勻漿棒勻化組織（約20至40下）（注意：參見注意事項6）

10． 將所有組織勻漿物移入15毫升錐形離心管

11． 放進4℃臺式離心機離心10分鐘，速度為1500g

12． 小心移出上清液到另一個新的預冷的15毫升錐形離心管——此步驟去除細胞核和未溶解的細胞

13． 放進4℃超速離心機離心10分鐘，速度為10000g

14． 小心抽去上清液，保留沉淀顆粒——此步驟獲得線粒體沉淀物

15． 加入xx微升保存液（Reagent E），充分混勻沉淀顆粒

16． 放進－70℃冰箱里備用或放進冰槽里繼續后續操作

17． 移取xx毫升的高純液（Reagent G）到6毫升超速離心管（注意：使用前搖勻高純液(Reagent G)）

18． 輕輕加入xx微升線粒體混勻液在高純液（Reagent G）的上面，避免震動

19． 放進4℃超速離心機離心45分鐘，速度為40000g

20． 小心取出超速離心管：可見下端棕色或乳黃色樣品帶（注意：在其上端可能有溶酶體樣品帶） 

21． 小心抽去線粒體樣品帶以上的液體

22． 小心收集線粒體樣品帶到2毫升離心管（注意：用3毫升針筒和18號針頭，置于樣品帶下緣小心緩慢抽吸）——此步驟獲得高純線粒體樣品

23． 加入xx至xx毫升保存液（Reagent E）

24． 放進4℃超速離心機離心10分鐘，速度為10000g

25． 小心抽去上清液

26． （選擇步驟）重復實驗步驟23至25一次

27． 加入xx微升保存液（Reagent E），混勻

28． 即刻移入到預冷的1.5毫升離心管

29． 放進－70℃冰箱里保存

關于我們：

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公司目前主營的產品有ELISA試劑盒、生化試劑、生化試劑盒、比色法試劑盒、標準品、對照品、抗體、細胞株、培養基、血清、酶、實驗耗材、進口試劑及實驗外包服務等。

應用領域：

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