Prepacked Desalting Column 葡聚糖凝膠過(guò)濾層析填料蛋白純化脫鹽柱簡(jiǎn)介

Prepacked Desalting Column適用于分子量大于5000Da的蛋白或其他大分子樣品的脫鹽、緩沖液置換或小分子的去除。

Prepacked Desalting Column 葡聚糖凝膠過(guò)濾層析填料蛋白純化脫鹽柱裝有8.3 ml Smartdex G-25中。Smartdex G-25系列介質(zhì)是以葡聚糖為基質(zhì)的凝膠過(guò)濾層析介質(zhì)，其工作原理主要是利用具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的葡聚糖凝膠的分子篩作用，根據(jù)被分離物質(zhì)的分子大小不同來(lái)進(jìn) 行分離。

表 1. Prepacked Desalting Column 產(chǎn)品性能

2. 使用說(shuō)明

2.1緩沖液的準(zhǔn)備

所用水和緩沖液在使用之前建議用0.22 pm或0.45 pm濾膜過(guò)濾。 平衡液為蛋白脫鹽后，用于保護(hù)蛋白的溶液，根據(jù)客戶(hù)需求自行選擇。

2.2樣品準(zhǔn)備

樣品在上樣前建議離心或用0.22 pm或0.45|jiti濾膜過(guò)濾，減少雜質(zhì)，防止堵塞柱子。

2.3樣品脫鹽

圖1.使用Prepacked Desalting Column脫鹽流程示意圖

1） 脫鹽柱準(zhǔn)備

將Prepacked Desalting Column垂直置于重力柱支架上，或用鐵架臺(tái)固定，先后打開(kāi)上蓋、下蓋，依靠重力流干保護(hù)液。

2） 平衡

加入4 ml平衡液（自主選擇合適溶液）對(duì)預(yù)裝介質(zhì)進(jìn)行平衡，重復(fù)5次，最終使用平衡液體積約3倍介質(zhì)體積。

3） 上樣

加入樣品，樣品上樣體積范圍1.0-2.5 ml,最大不超過(guò)2.5 ml,上樣體積不足時(shí)用平衡液稀釋樣品至1.0 mlo

4） 洗脫

待樣品進(jìn)入填料后，繼續(xù)加入平衡液進(jìn)行洗脫，分管收集洗脫液，從加入樣品開(kāi)始，先收集前端2.0 ml,然后再按照固定體積（建議0.5-1 ml/管）收集樣品，檢測(cè)每管蛋白濃度和鹽濃度，計(jì)算回收率和脫鹽效率。平衡液至少添加至蛋白洗脫*再停止。

5） 再平衡

加入4 ml平衡液對(duì)介質(zhì)進(jìn)行再平衡，重復(fù)至少5次，將殘留的鹽沖洗干凈，方可進(jìn)行下一次脫鹽。同一個(gè)柱子不建議用于不同樣品的脫鹽。

3. 清洗及保存

如果柱子的流速或者脫鹽效果變差，為除去殘留的雜質(zhì)，如變性蛋白或脂質(zhì)等，有時(shí)需要對(duì)脫鹽柱進(jìn)行在位清洗。常用的清洗液為0.1-0.2 M NaOH或非離子型去垢劑。

1） 加入一倍的柱體積0.1-0.2 M NaOH,依靠重力清洗介質(zhì)。

2） 加入足夠量的去離子水，沖洗介質(zhì)，直至pH值至中性。

3） 加入至少三倍柱體積20%乙醇溶液沖洗介質(zhì)，然后蓋好上蓋和下塞，在介質(zhì)上端保留至少1cm高的20%乙醇保護(hù)液，置于2-8°C保存。 注：不建議介質(zhì)多次重復(fù)再生和使用。

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