溶酶體β-半乳糖苷酶染色試劑盒

產品貨號：BA1802

產品規格：100T

產品簡介：

溶酶體β-半乳糖苷酶染色試劑盒(Lysosomal β-Galactosidase Staining Kit)是一種對溶酶體中酸性β-半乳糖苷酶(Acid β-Galactosidase)進行染色檢測的試劑盒，常用作細胞衰老檢測時的對照。在普通的光學顯微鏡下就可以觀測到細胞或組織中溶酶體酸性β-半乳糖苷酶的活力水平情況。本試劑盒可以用于培養細胞的檢測，也可以用于組織切片的檢測。絕大多數正常細胞都可以檢測到較高水平的溶酶體β-半乳糖苷酶活性水平。可以用作細胞衰老β-半乳糖苷酶染色時的參考染色。細胞衰老特異的β-半乳糖苷酶僅在衰老時表達，而溶酶體β-半乳糖苷酶幾乎在任何情況下都表達。

尚寶生物生產的溶酶體β-半乳糖苷酶染色試劑盒，以X-Gal為底物，在溶酶體酸性β-半乳糖苷酶的催化下會生成深藍色產物。從而在光學顯微鏡下很容易觀察到變成藍色的表達β-半乳糖苷酶的細胞或組織。本產品染色后的HeLa細胞請參考圖1。

圖1. HeLa細胞使用本產品染色后的示例圖片。

本試劑盒僅染色溶酶體酸性β-半乳糖苷酶，不會染色衰老特異性的β-半乳糖苷酶，也不會染色外源轉染表達的用于報告基因的β-半乳糖苷酶(大腸桿菌的β-半乳糖苷酶)。

主要特點：本試劑盒經過多方面的優化，能兼容普通的細胞培養用多孔板、移液管等聚苯乙烯類材質耗材或容器的試劑盒。本試劑盒可以有效避免由于和多孔板、移液管等的不兼容導致的染色偏弱、染色效果不穩定等情況。通常同類試劑盒要求使用可高溫高壓滅菌的聚丙烯(polypropylene)材質的耗材、容器或玻璃容器進行溶液的配制，而不能使用普通的多孔板、移液管等聚苯乙烯(polystyrene)類材質的容器或耗材，否則可能會出現絮狀沉淀，影響實驗觀察。即使嚴格按照要求操作，也會在染色時間比較長的情況下，容易出現絮狀物沉淀(參考圖2)。本試劑盒經過多方面的優化，對耗材或容器的材質無特殊要求，可以兼容普通的多孔板和移液管等常用耗材和容器。而且配制的工作液不會產生沉淀或不溶物，使用更加便捷。

國際同類試劑盒  尚寶生物試劑盒

圖2. 本試劑盒優化前后的對比圖。優化前，X-Gal溶液直接接觸聚苯乙烯類材質的材料如移液管、多孔板等會產生明顯的腐蝕(A圖)，使用聚苯乙烯容器配制染色工作液后，在顯微鏡下觀察有異常的絮狀不溶物(C圖)；優化后，X-Gal溶液直接接觸聚苯乙烯類材質的材料觀察不到有任何異常情況(B圖)，使用聚苯乙烯容器配制染色工作液后，在顯微鏡下觀察也沒有任何異常情況(D圖)。

如果使用6孔板檢測，足夠測定100個樣品；使用24孔板測定，足夠測定400個樣品；使用96孔板測定，足夠測定1000個樣品。對于組織切片或組織塊，可以檢測的樣品數量視樣品的大小而定。對于普通切片的滴染足夠檢測100個樣品。

產品組成：

使用說明：

1. 對于貼壁細胞：

a. 對于6孔板中培養的細胞，吸除細胞培養液，用PBS或HBSS洗滌1次，加入1毫升β-半乳糖苷酶染色固定液，室溫固定15分鐘。對于其它類型的培養板，固定液及后續溶液的用量參照此比例進行操作。

b. 吸除細胞固定液，用PBS或HBSS洗滌細胞3次，每次3分鐘。

c. 吸除PBS或HBSS，每孔加入1毫升染色工作液。染色工作液的配制方法參考表1。
表1. 染色工作液的配制方法。

d. 37℃孵育過夜，可以用parafilm或保鮮膜封住6孔板防止蒸發。

e. 普通光學顯微鏡下觀察。如不能及時觀察計數，可以去除染色工作液，加入2毫升PBS，4℃可以保存數天；或者加上封片液封片后，4℃可以保存較長時間。

2. 對于懸浮細胞：

a. 離心收集細胞至1.5ml離心管內，用PBS或HBSS洗滌1次，加入1毫升β-半乳糖苷酶染色固定液，室溫固定15分鐘。固定時可以在搖床上緩慢搖動，以避免細胞結成團塊。

b. 離心，吸除細胞固定液，用PBS或HBSS洗滌細胞3次，每次3分鐘。

c. 離心，吸除PBS或HBSS，每管加入0.5-1毫升染色工作液。染色工作液的配制方法參考表1。

d. 37℃孵育過夜。

e. 取部分染色后的細胞，滴加到載玻片上或6孔板內，普通光學顯微鏡下觀察。如不能及時觀察計數，可以離心，去除染色工作液，然后加入1毫升PBS，4℃可以保存數天。如果離心，取細胞用于涂片，加上封片液封片后，4℃可以保存較長時間。

3. 對于組織切片：

a. 對于石蠟切片先按照常規方法進行脫蠟和水化處理。對于冷凍切片直接按照以下步驟進行。

b. 加入適當體積的β-半乳糖苷酶染色固定液，以充分蓋住組織為宜，室溫固定不少于15分鐘。

c. 用PBS浸泡洗滌組織3次，每次不少于5分鐘。

d. 吸除PBS，加入適當量的染色工作液。染色工作液的配制方法參考表1。

e. 37℃孵育過夜，可以用parafilm或保鮮膜封住防止蒸發。最好把整個切片浸泡在染色工作液中。

f. 普通光學顯微鏡下觀察。如不能及時觀察，加上封片液封片后4℃可以保存較長時間。

注意事項：

1. β-半乳糖苷酶染色固定液對人體有毒、有腐蝕性，操作時請特別小心，并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。

2. X-Gal溶液在-20oC或4oC保存會凍結，室溫或37oC水浴2-5分鐘并適當搖動即可*融解。

3. β-半乳糖苷酶染色液B在剛剛溶解后會觀察到有沉淀，屬正常現象，充分混勻或Vortex后，沉淀會全部溶解。作為常規，試劑使用前必須確保沉淀全部溶解，并且混勻。

4. 使用96孔板等多孔板進行檢測時，如果孵育過夜容易產生所謂的“邊緣效應”(edge effect)，即多孔板四周的孔由于和外界最直接接觸，易受外界環境影響，其中明顯的是四周細胞培養孔的蒸發效應。邊緣效應會導致細胞生長不均勻、細胞分布不均一、培養液體積不一致、培養液中相關成分的濃度、pH值不一致。建議采取以下方法避免96孔板等多孔板的邊緣效應：避免孵育過長時間，以避免蒸發等帶來的邊緣效應；棄用邊緣孔并在棄用的邊緣孔中加入等量的水、PBS或其他適當溶液；在多孔板非孔的凹陷處加入適量的水或其他適當溶液；將整塊板放在濕盒中；使用防揮發蓋；在實驗設計時，實驗樣品最好進行隨機分配，不要將某一組樣品固定放在某個位置而引入可能的系統性誤差。

5. 需自備PBS或HBSS(Hanks Balanced Salt Solution)。

6. 本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。

7. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

保存條件：-20oC保存，一年有效。其中X-Gal溶液需避光保存。