TSKgel FcR-IIIA-NPR——高效篩選抗體ADCC活性色譜柱

在單克隆抗體藥物的初期研發(fā)階段中，通過對細胞株實施篩選，選出能產生滴度較高、ADCC活性較高的細胞株。此時常會用到的幾種評估方法是，通過生物檢定法測定ADCC活性；通過表面等離子共振法（SPR）測定人體IgG受體（FcγⅢa等）的親和力；通過LC/MS分析抗體酶切下來的糖鏈結構等。但這些方法都需要花費大量的時間和人力。

能夠把這些復雜的評估分析法由繁化簡，并快速完成分析的HPLC色譜柱就是TSKgel FcR-IIIA-NPR。

使用TSKgel FcR-IIIA-NPR色譜柱可以直接分離抗體，無需對細胞培養(yǎng)液進行前處理。抗體主要可以分離出3個洗脫峰。已有研究表明，抗體糖鏈末端的半乳糖數(shù)量越多，在此色譜柱中的保留能力越強，而保留能力越強的洗脫峰，其ADCC活性就越高。

細胞培養(yǎng)液中單克隆抗體的分離

TSKgel FcR-IIIA-NPR色譜柱可以用來測定和監(jiān)控細胞培養(yǎng)時抗體糖鏈的性狀變化。取不同培養(yǎng)天數(shù)的細胞培養(yǎng)液，使用Protein A填料對抗體樣品粗純后，再采用TSKgel FcR-IIIA-NPR色譜柱分析的結果如圖所示。

抗體細胞培養(yǎng)天數(shù)和產生抗體的變化

高效篩選抗體ADCC活性色譜柱

隨著培養(yǎng)天數(shù)的延長，抗體的3個洗脫峰會向前側的洗脫峰位移。雖然延長了細胞培養(yǎng)天數(shù)，抗體的絕對產量增加，但是由于受到細胞外糖鏈修飾酶的影響，在色譜柱中的保留能力較高的抗體（多糖的末端半乳糖數(shù)量較多的抗體）的洗脫峰反而減少了。因此，可以推定產生的抗體的ADCC活性已經(jīng)降低。

TSKgel FcR-IIIA-NPR的主要分析用途

①確認不同細胞株 (CHO細胞、HEK細胞等) 中抗體的性狀變化。

②確認多個細胞株篩選時抗體的性狀變化。

③確認當改變細胞培養(yǎng)基添加劑時抗體的性狀變化

④細胞培養(yǎng)過程中隨培養(yǎng)天數(shù)的變化導致抗體性狀變化的確認。

⑤細胞培養(yǎng)規(guī)模放大 (更改培養(yǎng)方法) 時，確認抗體是否發(fā)生性狀變化。

北京綠百草科技發(fā)展有限公司成立于1999年，坐落于北京市昌平區(qū)企業(yè)墅上區(qū)，是一家專業(yè)經(jīng)營純化填料、色譜柱、化學試劑和實驗室設備及相關技術服務的科技型企業(yè)，產品主要應用于制藥、生物、食品、環(huán)境和農業(yè)等領域。憑借較好的產品和服務，綠百草科技與廣大客戶建立了長期穩(wěn)定的戰(zhàn)略合作關系，被眾多企業(yè)和科研機構認定為“供應商”，得到了政府部門的關懷和有力支持。

經(jīng)過十多年的快速發(fā)展，綠百草科技創(chuàng)建了產品種類齊全、技術服務的色譜耗材平臺。綠百草科技被眾多國際供應商選擇為他們在中國區(qū)的代理，包括

美國Restek公司、美國Zymo Research生物科技公司、日本三菱化學株式會社、加拿大SiliCycle股份有限公司、日本GL Sciences株式會社、美國Benson聚合物股份有限公司、日本東洋曹達株式會社、日本大賽璐化學工業(yè)株式會社、日本Nacalai Tesque株式會社、日本信和化工株式會社、日本住化分析株式會社等。同時，還提供美國USP標準物質、歐洲藥典標準物質EDQM、英國化學學會LGC標準物質、加拿大TRC標準物質等。目前，綠百草科技已成為國內制藥、生物、食品、環(huán)境和農業(yè)等領域的較大供應商之一。