雞傳染性支氣管炎病毒熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒
- 公司名稱 山東藍(lán)都生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2022/4/7 0:39:43
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疫苗、獸藥，食品安全檢測(cè)抗原抗體試劑盒 、親和柱、檢測(cè)卡、生產(chǎn)原材料，動(dòng)物疫病檢測(cè)抗原抗體檢測(cè)卡試劑盒
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
|---|
雞傳染性支氣管炎病毒熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
【用途】用于雞傳染性支氣管炎病毒核酸的檢測(cè)。
【規(guī)格】50T/盒
【試劑】
編號(hào) | 數(shù)量（50T） | 保存 | |
SR-I | 10mL | 室溫 | A盒 |
SR-II | 25mL | 室溫 | |
SR-Ⅲ | 36mL | 室溫 | |
SR-Ⅳ | 18mL | 室溫 | |
TU-1 | 3.75mL | 室溫 | |
TU-2 | 2.5mL | 室溫 | |
RT-PCR反應(yīng)液 | 500uL | -20℃ | B盒 |
酶混合液 | 50uL | -20℃ | |
引物混合液 | 100uL | -20℃ | |
陽(yáng)性對(duì)照 | 30uL | -20℃ | |
陰性對(duì)照 | 100uL | -20℃ | |
ddH2O | 1mL | -20℃ | |
6xDNA Loading buffer | 100uL | -20℃ | |
Marker DL2000 | 50uL | -20℃ | |
【操作步驟】
1.雞傳染性支氣管炎病毒熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒核酸提取
(1) 取疑似病料（氣管及分泌物、腎臟、肺臟等病毒靶組織），用PBS研磨成1：3懸液，在-20℃凍融1次，經(jīng)12000 r/min離心3 min，上清液-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/span>
（2）取200uL上清液，移入1.5mL滅菌EP管中，加入200uLSR-I，漩渦振蕩混合均勻，靜置5min。
（3）加75uL TU-1，漩渦振蕩混合均勻，12000r/min離心5 min。
（4）將上清轉(zhuǎn)移到新的2 ml離心管（試劑盒內(nèi)提供）中，加入300 uL SR-Ⅳ，上下倒置6-8次，混合均勻。
（5）將步驟4中的混合液移入制備管中（試劑盒內(nèi)提供），并將制備管置于同一2 ml離心管，8000 r/min離心1min。
（6）棄濾液，將制備管置回到2 ml離心管中，加500 uL SR-II，室溫靜置1min，12000 r/min離心1 min。
（7）棄濾液，將制備管置回到2 ml離心管中，加700 uL SR-Ⅲ，12000 r/min離心1 min。
（8）將制備管置回到2 ml離心管中，12000 r/min離心2min。
（9） 將制備管置于潔凈的1.5 ml離心管中（試劑盒內(nèi)提供），在制備管膜中央加40 uL TU-2， 室溫靜置1 min。12000 r/min離心1 min洗脫。洗脫液即為模板，即用或-20℃凍存?zhèn)溆谩?/span>
2.One-Step RT- PCR加樣體系(20uL體系)
RT-PCR反應(yīng)液 | 10uL |
引物混合液 | 2uL |
酶混合液 | 0.8uL |
ddH2O 模板 | 5.2uL 2uL |
3.反應(yīng)程序
第1步 | 50℃ | 45min | |
第2步 第3步 | 94℃預(yù)變性 94℃變性 | 5min 45 s | |
第4步 | 52℃退火 | 45 s | 34個(gè)循環(huán)（3～5步） |
第5步 | 72℃延伸 | 45 s | |
第6步 | 72℃延伸 | 6min | |
第7步 | 4℃終止 | 5min |
4.電泳
配制1.0%瓊脂糖凝膠，取PCR產(chǎn)物5uL，混合1uL6xDNA Loading buffer，加樣于凝膠孔中，同時(shí)在相鄰孔加5uL DL2000 DNA Marker，在120-150v 電壓下，1×TAE液中電泳15-20min，在紫外成像儀下觀察結(jié)果。
【結(jié)果判定】
在約490bp左右位置出現(xiàn)擴(kuò)增帶，表明雞傳染性支氣管炎病毒核酸檢測(cè)陽(yáng)性；
若在490bp處沒(méi)有條帶出現(xiàn)則樣品判為陰性。
1.標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性片段M.DL2000 Marker
【注意事項(xiàng)】
1. 陽(yáng)性對(duì)照極易污染試驗(yàn)環(huán)境，如果做陽(yáng)性對(duì)照,吸取陽(yáng)性對(duì)照槍頭妥善處理
2. -20℃保存的試劑在使用前應(yīng)*融化，振蕩混勻后 8000rpm 離心 15 秒使液體全部沉于管底，置冰盒中取用。嚴(yán)禁使用超過(guò)有效期限的試劑；嚴(yán)禁混用不同試劑盒組分。
3. PCR 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按功能分為配液區(qū)、樣品處理區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、電泳區(qū)。物流方向依次為配液區(qū) →樣品處理區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→電泳區(qū)。所有接觸病料的物品、器具，尤其是陽(yáng)性對(duì)照及PCR 產(chǎn)物和使用后的電泳緩沖液均應(yīng)合理處置，以免污染實(shí)驗(yàn)室。
4. 嚴(yán)格按照國(guó)標(biāo)和說(shuō)明書要求操作。吸取液體時(shí)移液器吸頭盡量在液體上層吸取，移液精確；吸取不同液體時(shí)必須更換移液器滴頭，防止試劑組分污染以及樣品污染。
5.試劑盒組分在生產(chǎn)分裝時(shí)考慮到液體的損耗，實(shí)際裝量略多于標(biāo)注裝量，因此嚴(yán)禁直接在 原包裝中配制反應(yīng)體系，以免造成反應(yīng)體系各組分比例不準(zhǔn)確。
【保存期】本制品有效期為1年。
僅供獸醫(yī)診斷使用
長(zhǎng)期提供原核、真核蛋白表達(dá)構(gòu)建服務(wù)
長(zhǎng)期 提供抗原偶聯(lián)、 HRP、生物素、糖基化、親和素、FITC等偶聯(lián)標(biāo)記多肽、抗體、抗原、蛋白等服務(wù)
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