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細(xì)胞傳代培養(yǎng)

具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 公司名稱 上海昆盟生物科技有限公司
  • 品牌 其他品牌
  • 型號(hào)
  • 產(chǎn)地 中國
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間 2024/7/18 13:46:40
  • 訪問次數(shù) 2627

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上海昆盟生物科技有限公司(COWELDGEN SCIENTIFIC)是一家專注于生命科學(xué)領(lǐng)域提供相關(guān)試劑產(chǎn)品和服務(wù)的生物高科技企業(yè),坐落于上海聚科生物產(chǎn)業(yè)園。公司主要提供種類齊全的細(xì)胞系和多種原代細(xì)胞、質(zhì)量穩(wěn)定的細(xì)胞培養(yǎng)試劑以及檢測試劑產(chǎn)品、成熟高效的技術(shù)服務(wù)。本著“守正創(chuàng)新,科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)”的理念,我們以高標(biāo)準(zhǔn)塑造行業(yè)品牌,以全新的視野構(gòu)建現(xiàn)代企業(yè),勇于探索和創(chuàng)新。公司業(yè)務(wù)范圍涉及全國各省市自治區(qū),目前已與國內(nèi)多家醫(yī)院、高校、科研院所、生物科技公司建立了良好的合作關(guān)系,贏得了良好的市場聲譽(yù)和廣泛的認(rèn)可,我們保證將繼續(xù)為廣大科研用戶提供專業(yè)、高效、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品及服務(wù)!

 

 

 

 

細(xì)胞產(chǎn)品,分子試劑,細(xì)胞檢測試劑盒,技術(shù)服務(wù)

應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

細(xì)胞傳代培養(yǎng)


根據(jù)細(xì)胞生長的恃點(diǎn),細(xì)胞傳代培養(yǎng)方法有3種:貼壁生長細(xì)胞傳代、半懸浮生長細(xì)胞傳代(Hela細(xì)胞)、懸浮生長細(xì)胞傳代。

◆ 貼壁生長的細(xì)胞用消化法傳代;

◆ 部分貼壁生長的細(xì)胞用直接吹打可傳代;

◆ 懸浮生長的細(xì)胞可以采用直接吹打或離心分離后傳代,或用自然沉降法吸除上清后,再吹打傳代。


實(shí)驗(yàn)材料:細(xì)胞、D-Hanks液、胎牛血清、DMEM培養(yǎng)基 / RPMI1640培養(yǎng)基、Penicillin-Streptomycin(P/S雙抗)、胰蛋白酶

儀器與耗材:凈化工作臺(tái)、離心機(jī)、恒溫水浴箱、冰箱、倒置相差顯微鏡、培養(yǎng)箱、玻璃瓶、細(xì)胞培養(yǎng)瓶/皿、廢液缸、離心管、紅血球計(jì)數(shù)板、不同規(guī)格的移液器及其配套的無菌吸頭、吸管


1.  貼壁細(xì)胞的消化法傳代:

1)先吸除或倒掉瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液。

2)D-Hanks液洗2~3次。

3)向瓶內(nèi)加入適量消化液(胰蛋白酶或與EDTA混合液)輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)瓶,使消化液流遍所有細(xì)胞表面。(注意:胰蛋白酶要預(yù)溫,溫度37℃左右為宜。

4)消化最好在37℃環(huán)境下進(jìn)行,消化2~5 min 后把培養(yǎng)瓶放置顯微鏡下進(jìn)行觀察,發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)回縮,細(xì)胞間隙增大后,應(yīng)立即終止消化。

5)吸除或倒掉消化液,如用EDTA消化,需加Hanks液數(shù)毫升,輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶把殘留消化液沖掉,再添加培養(yǎng)液。如僅用胰蛋白酶可直接加少許含血清的培養(yǎng)液,終止消化。

6)用彎頭吸管,吸取瓶內(nèi)培養(yǎng)液,反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞。從培養(yǎng)瓶底部一邊開始到另一邊結(jié)束,以確保所有底部都被吹到,使細(xì)胞脫離瓶壁后形成細(xì)胞懸液。吹打時(shí)動(dòng)作要輕柔,不要用力過猛。 

7) 細(xì)胞計(jì)數(shù)后分別接種在新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。

8)置于37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)。(注意:要定時(shí)觀察細(xì)胞,如發(fā)現(xiàn)污染,應(yīng)及時(shí)處理。

 

2.  懸浮細(xì)胞的傳代:懸浮細(xì)胞傳代可離心收集細(xì)胞后傳代,或直接傳代。

離心傳代法:

1) 將細(xì)胞連同培養(yǎng)液一并轉(zhuǎn)移到15 ml 離心管內(nèi)。

2) 800~1000 rpm離心5 min。(注意:離心轉(zhuǎn)速要合適。轉(zhuǎn)速過低,不能有效分離細(xì)胞;離心速度過大,時(shí)間過長,會(huì)擠壓細(xì)胞造成損傷甚至死亡。)

3) 棄去上清,加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi),用吸管吹打形成細(xì)胞懸液。

4) 計(jì)數(shù),分別接種在新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。

 直接傳代法:

讓懸浮細(xì)胞慢慢沉淀在瓶底后,將上清液吸掉1/2~2/3,然后用吸管吹打形成細(xì)胞懸液后再傳代。


3.  部分貼壁細(xì)胞的傳代

1)部分貼壁不牢的細(xì)胞,如Hela細(xì)胞等,不經(jīng)消化處理直接吹打可使細(xì)胞從壁上脫落下來,而進(jìn)行傳代。
2)對絕大部分貼壁生長的細(xì)胞,因直接吹打?qū)?xì)胞損傷較大,細(xì)胞常有較大數(shù)量的丟失,因而需消化后,才能吹打傳代。



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