Lemo21(DE3)化轉(zhuǎn)表達(dá)感受態(tài)

產(chǎn)品簡介 DH10B 電擊感受態(tài)細(xì)胞只能用于電擊轉(zhuǎn)化，不能用于熱激轉(zhuǎn)化。DH10B 菌株來源于 MC1061 菌株， mcrA、mcrBC 及 mrr 突變使 DH10B 菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的 DNA (無論真 核生物還是原核生物的基因組 DNA 都能被高效的轉(zhuǎn)入 DH10B 中)。recA1 和 endA1 的突變有利于插 入 DNA 的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒 DNA 的提取。φ80dlacZ?M15 標(biāo)記的存在使 DH10B 可用于藍(lán)白斑篩 選，rpsL 賦予其鏈霉素抗性。 DH10B 感受態(tài)細(xì)胞適用于大質(zhì)粒的構(gòu)建或者各種文庫構(gòu)建，經(jīng)特殊 工藝制作，pUC18 質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>1010cfu/μg DNA。

Lemo21(DE3)化轉(zhuǎn)表達(dá)感受

存儲(chǔ)條件 -80 ℃保存；請(qǐng)勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。 質(zhì)量控制 無外源質(zhì)粒 DNA 殘留； 電轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)化效率≥1010 cfu/μg pUC18 DNA。 使用方法 1. 0.1cm 電擊杯和杯蓋從儲(chǔ)存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘，待其瀝干水分，正置5分鐘， 使乙醇充分揮發(fā)，待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中，壓實(shí)冰面，電極杯頂離冰面 0.5 cm 以方便蓋上杯 蓋，冰中靜置 5 分鐘充分降溫。 2. 取-80℃保存的 DH10B 電擊感受態(tài)細(xì)胞插入冰中 5 分鐘，待其融化，加入目的 DNA (質(zhì)?；蜻B接 產(chǎn)物)并用手撥.打 EP 管底輕輕混勻，避免產(chǎn)生氣泡，立即插入冰中。

A. 測(cè)定轉(zhuǎn)化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的對(duì)照質(zhì)粒 pUC18；

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B. 對(duì)于連接產(chǎn)物，請(qǐng)用乙醇沉淀 DNA 后加入適量 TE 緩沖液 (10mM Tris HCl, pH7.5; 1mM EDTA)重 懸，DNA 濃度不超過 100ng/μl，體積不超過 5μl/50μl 感受態(tài)。 3. 用 200 μl 槍頭將感受態(tài)-DNA 混合物快速移到電擊杯中，避免產(chǎn)生氣泡，蓋上杯蓋。 4. 啟動(dòng)電轉(zhuǎn)儀，設(shè)置參數(shù)：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此為 BioRad 電轉(zhuǎn)儀推薦參數(shù)，也可按 所用電轉(zhuǎn)儀推薦的參數(shù)操作），將電擊杯快速放入電轉(zhuǎn)槽中，電擊完成快速插入冰中。 5. 2 分鐘后從冰中取出電擊杯，放室溫，加入 700 μl 不含抗生素的無菌 S.O.C. 培養(yǎng)基（室溫），用 1ml 槍吹吸電擊杯底部數(shù)次混勻后，轉(zhuǎn)移到 50ml 離心管（BD Falcon50ml 錐形離心管等），向離心 管中補(bǔ)加 S.O.C. 培養(yǎng)基至 5ml。37℃，225 rpm 復(fù)蘇 60 分鐘。