TurboNuclease內(nèi)切核酸酶
| 參考價(jià) | ￥ 3150 |
| 訂貨量 | ≥1支 |
- 公司名稱 上海倍篤生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地 USA
- 廠商性質(zhì) 代理商
- 更新時(shí)間 2020/10/9 18:11:20
- 訪問(wèn)次數(shù) 84
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TurboNuclease，PRIME-XV，LentiBOOST，BalanCD HEK293，Turbo3C protease，UltraGRO，PEI MAX，Transporter 5
| CAS | 9025-65-4 | 純度 | >99% |
|---|---|---|---|
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50,000 Units |
| 貨號(hào) | N0103M | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
| 主要用途 | 消化核酸、降低粘度 |
應(yīng)用
- 在蛋白純化及樣品制備過(guò)程中，能夠有效降低粘稠度；
- 在病毒疫苗、病毒載體（如腺病毒、AAV等）及溶瘤病毒等制備過(guò)程中，去除核酸污染；
- 在蛋白電泳（SDS-PAGE）、2D電泳過(guò)程中，能減少條帶拖尾現(xiàn)象；
- 在PBMC解凍、類器官處理中，能減少或阻止細(xì)胞聚團(tuán)；
- 在絕大多數(shù)應(yīng)用中，TurboNuclease能夠替代粗提的DNase I。
優(yōu)勢(shì)
- 與競(jìng)品的重組粘質(zhì)沙雷氏菌的細(xì)胞外內(nèi)切核酸酶相比，TurboNuclease能耐受更高的鹽濃度、具有更寬的適pH范圍；
- 與Benzonase相比，TurboNuclease有更寬的適合pH范圍；
- 昆蟲表達(dá)系統(tǒng)中，pH低于6.5，與其他核酸酶相比，TurboNuclease酶活更高；
- 能耐受500mM鹽濃度，——在500 mM NaCl條件下起作用，但酶活會(huì)有所降低。
酶活定義
在37℃，pH 8.0，50 mM Tris-HCl及1 mM MgCl2反應(yīng)體系中，一個(gè)單位的TurboNuclease酶在30分鐘內(nèi)可將鮭魚精子DNA消化成1.0 OD260的酸可溶寡核苷酸；等同于將50µg的鮭魚精子DNA*消化成寡核苷酸。
酶活性和特異性
TurboNuclease比活力為>1.3x106 units/mg，相當(dāng)于>3x106 Kunitz units/mg，是高純度牛DNase I比活力（約為25,000 Kunitz units/mg）的100倍以上。
TurboNuclease和Benzonase有相似的比活力。TurboNuclease無(wú)可檢測(cè)的蛋白酶活性。
組分及參數(shù)
TurboNuclease保存液是50 mM Tris-HCl, pH 8.0, 50 mM NaCl, 5 mM MgCl2,及50% Glycerol。
通過(guò)Accelagen的*純化工藝制得，純度達(dá)到99%以上；
內(nèi)毒素<0.1 EU/1000units，由Charles River的Endosafe PTS LAL檢測(cè)得到。
儲(chǔ)存條件
建議儲(chǔ)存在-20℃，穩(wěn)定保存2年以上。37℃條件下在保存液中至少穩(wěn)定3周，而不影響活性。
使用建議
- 為了降低細(xì)胞裂解液粘稠度，建議加入10-100 U/g細(xì)胞量，4℃孵育10-30分鐘；
- 在AAV純化過(guò)程中，* 5 – 50 U/ml的酶用量，37℃孵育1-2小時(shí)。
緩沖體系、細(xì)胞類型及細(xì)胞裂解方法等，都會(huì)影響終的消化效果。TurboNuclease比活力*，細(xì)胞裂解液中低于1µl /ml的用量，并不影響任何下游實(shí)驗(yàn)。
Figure 1. 37℃條件下，50 µg的鮭魚精子DNA與量的TurboNuclease和競(jìng)品的粘質(zhì)沙雷氏菌內(nèi)切酶孵育30分鐘，EtBr染色。孵育體系是50 mM Tris-HCl, pH 8.0, 1 mM MgCl2。 |
Figure 2. 通過(guò)Accelagen的*純化工藝制的TurboNuclease，純度達(dá)到99%以上。 |
貨號(hào) | 描述 | 規(guī)格 | 儲(chǔ)存條件 | 運(yùn)輸條件 |
N0103M | TurboNuclease, 250units/ul | 50,000 units | -20℃ | 2-8℃ |
N0103L | TurboNuclease, 250units/ul | 250,000 units | -20℃ | 2-8℃ |
Q&A：
【Q1】怎么滅活TurboNuclease？如何去除TurboNuclease？
【A1】TurboNuclease活性狀態(tài)需要Mg離子，EDTA及其他能去除Mg或Mn的金屬螯合劑都能抑制TurboNuclease。TurboNuclease能耐受苛刻條件，比大多數(shù)蛋白都要穩(wěn)定。目前，沒(méi)有特異的方法去除TurboNuclease。AAV或蛋白下游純化用的大部分色譜柱都不會(huì)吸附TurboNuclease。
【Q2】需要更換緩沖體系時(shí)，為了保持TurboNuclease的活性，必需哪些條件？
【A2】TurboNuclease活性狀態(tài)需要Mg離子。TurboNuclease保存液中的Mg足以保持酶活，額外添加1-2mM Mg離子會(huì)增強(qiáng)酶活。
【Q3】TurboNuclease能跟蛋白酶抑制劑聯(lián)用嗎？
【A3】可以，蛋白酶抑制劑一般不影響TurboNuclease的活性。由于很多蛋白酶抑制劑中含有EDTA，會(huì)影響TurboNuclease活性。
【Q4】目標(biāo)蛋白不可溶，需要在變性條件下做純化。那么，TurboNuclease能夠在尿素或鹽酸胍環(huán)境下起作用嗎？
【A4】在高濃度的尿素或鹽酸胍條件下，TurboNuclease會(huì)變性，并不起作用。
【Q5】TurboNuclease跟其他核酸酶相比，有哪些優(yōu)勢(shì)？
【A5】與Benzonase及許多核酸酶等一樣，TurboNuclease也偏好低離子濃度、有適pH范圍。相比其他競(jìng)品的重組粘質(zhì)沙雷氏菌的細(xì)胞外內(nèi)切核酸酶產(chǎn)品，TurboNuclease能耐受更高的鹽濃度、具有更寬的適pH范圍。與Benzonase相比，TurboNuclease有更寬的適合pH范圍。同時(shí)，TurboNuclease能在500 mM NaCl條件下起作用，但酶活會(huì)有所降低。
AAV純化相關(guān)文獻(xiàn)——
Karina Kawka et al, (2021) Integrated development of enzymatic DNA digestion and membrane chromatography processes for the purification of therapeutic adenoviruses. Separation and Purification Technology. 254
Neil G.Rumachik et al, (2020) Methods Matter: Standard Production Platforms for Recombinant AAV Produce Chemically and Functionally Distinct Vectors. Molecular Therapy. 18: 98-118
April R.Giles et al, (2018) Deamidation of Amino Acids on the Surface of Adeno-Associated Virus Capsids Leads to Charge Heterogeneity and Altered Vector Function. Molecular Therapy 26: 2848-2862
Wang Q et al, (2015) Identification of an adeno-associated virus binding epitope for AVB sepharose affinity resin. Mol Ther. 2: 15040
Cecchini S et al, (2011) Reproducible High Yields of Recombinant Adeno-Associated Virus Produced Using Invertebrate Cells in 0.02- to 200-Liter Cultures. Human Gene Therapy 22:1021–1030
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