人抗神經/節苷脂抗體(GM1)試劑盒

工作原理

• 間接法：預先將人抗神經/節苷脂抗體（GM1）捕獲抗原包被在微孔板上。加入標本、標準品以及 HRP 標記的檢測抗體后，溫育并洗滌。底物 TMB 在過氧化物酶催化下，先轉化為藍色，再在酸作用下變為最終的黃色。顏色深淺與樣品中的人抗神經/節苷脂抗體（GM1）呈正相關，通過酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），即可計算樣品濃度。

• 雙抗體夾心法：把抗 GM1 抗體包被于酶標板，樣本中的 GM1 抗體與之結合形成固相抗原復合物。隨后加入生wu素化的抗 GM1 抗體，再加入 ABC 復合物與生物wu素抗體結合，形成免疫復合物。加入 TMB 顯色底物，顯色情況與樣本中 GM1 抗體含量成正比，同樣借助酶標儀測定 OD 值來定量或定性分析抗體含量。

試劑盒構成

• 微孔酶標板：已包被抗體或抗原，為抗原抗體反應提供場所，如 96 孔配置為 12 孔 ×8 條，48 孔配置為 12 孔 ×4 條。

• 標準品：通常有 6 管，濃度依次為特定梯度，如 80、40、20、10、5、2.5 ng/mL ，用于繪制標準曲線。

• 樣本xi釋液：用于稀釋樣本，確保樣本濃度處于試劑盒可檢測范圍內，不同規格試劑盒的體積有所差異，如 96 孔配置為 6mL，48 孔配置為 3mL。

• 檢測抗體 - HRP：與樣本中的抗體或抗原結合，催化底物顯色，96 孔配置為 10mL，48 孔配置為 5mL。

• 洗滌緩沖液：一般為 20× 濃縮液，使用時需按 1：20 用蒸餾水稀釋，如 96 孔配置的 25mL 濃縮液，可稀釋出 500mL 洗滌液，用于洗去未結合的物質，減少非特異性反應。

• 底物 A、B：兩者混合后在酶的作用下發生顯色反應，不同規格試劑盒中兩者的體積一般相同，如 96 孔和 48 孔配置中，底物 A、B 均為 6mL 和 3mL。

• 終止液：用于終止顯色反應，保證檢測結果的準確性，體積與底物 A、B 對應，如 96 孔配置為 6mL，48 孔配置為 3mL。

• 封板膜、說明書、自封袋：封板膜用于在溫育過程中防止液體蒸發和外界污染，一般有 2 張；說明書詳細介紹試劑盒的使用方法、注意事項、檢測原理等；自封袋用于保存未使用完的試劑盒組件。

樣本要求

• 血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置 2 小時或 4℃過夜，然后以 1000×g 離心 20 分鐘，取上清。若暫時不檢測，上清可置于 -20℃或 -80℃保存，但要避免反復凍融。

• 血漿：使用 EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標本，采集后的 30 分鐘內，于 2 - 8℃以 1000×g 離心 15 分鐘，取上清檢測。保存條件與血清相同。

• 組織勻漿：用預冷的 PBS (0.01M, pH = 7.4) 沖洗組織，去除殘留血液，稱重后剪碎。按 1:9（一般比例）的重量體積比，將剪碎的組織與 PBS 加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。還可通過超聲破碎或反復凍融進一步裂解組織細胞，最后以 5000×g 離心 5 - 10 分鐘，取上清檢測。

• 細胞培養物上清或其它生物標本：以 1000×g 離心 20 分鐘，取上清檢測。保存方式與血清一致。需注意，標本溶血會影響檢測結果，溶血標本不宜用于此項檢測。

操作流程

1. 準備工作：從冷藏環境取出試劑盒后，在室溫平衡后方可使用。按 1：20 用蒸餾水稀釋 20× 洗滌緩沖液。準備好酶標儀（450nm 檢測波長濾光片，570nm 或 630nm 校正波長濾光片）、高精度加樣器及對應槍頭、37℃恒溫箱等器材。

2. 加樣：從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品 50μL；樣本孔中加入待測樣本 50μL；空白孔不加。

3. 溫育與結合：除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體 100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。

4. 洗滌：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板 5 次（也可用洗板機洗板）。

5. 顯色：每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。

6. 終止與讀數：每孔加入終止液 50μL，15min 內，在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值。

性能特點

• 檢測范圍：一般在 2.5 ng/mL - 80 ng/mL，不同品牌試劑盒會有所差異，例如上海信裕生物科技有限公司的產品檢測范圍為 1.563 - 100mIU/ml。

• 靈敏度：多數試劑盒能檢測到小于 0.1 ng/mL 的濃度，如上海仁捷生物科技有限公司的產品靈敏度可達此標準，上海信裕生物的產品最小可測人 Anti - Ganglioside M1 Antibody 達 0.938mU/ml。

• 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應，確保檢測結果的準確性。

• 重復性：板內變異系數小于 10% ，板間變異系數小于 15% ，保證了不同批次實驗結果的可靠性