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1、常見細胞培養污染及防治

常見污染有細菌污染、霉菌污染、支原體污染、真菌污染、原蟲污染等。

2、細胞培養過程中污染的來源主要有以下幾條途徑：

• 不潔的動物組織標本，很多動物組織本該是無菌的，但由于取材時不小心也會有污染的機會。另外有的組織本身含有細菌，如

取材時不用濃的抗生素洗液洗滌浸泡，也會帶菌，造成細胞污染。

• 空氣中含有大量的微生物，如果操作室與外界隔離不嚴或消毒不充分，很容易造成污染。另外，凈化工作臺使用過久，濾板未定期更換或長久不更換，外界氣流過強，污染空氣進入操作區，也會導致污染。春夏季南方地區多雨，空氣濕度大，含菌量多，工作不注意也易造成污染。

• 清洗消毒培養用物品、材料洗刷不凈，培養用液和器材滅菌不*也會引入微生物和有毒物質。

• 操作來自操作者的污染主要有以下幾方面：

- 器材和溶液使用前未仔細檢查是否污染過，或者是否已經消毒滅菌處理過，或者雖經處理，時隔已久又末重新處理。

- 操作者未戴帽子，呼出氣中含有細菌和支原體。

- 培養瓶口未用酒精擦和燒灼。

- 操作者不當心，動作不正確而將吸管或無菌器具碰到了污染的物品，如手上皮膚和瓶子外壁等。

- 操作者操作時大聲說話，來回走動揚起灰塵等

- 細胞傾液時倒出培養瓶或者滴落在超凈臺上，未及時擦凈或者灼燒。

- 移液管吸取液體時將空氣中的氣流吸入培養瓶中。

- 長時間的將離心管放在離心機中，可能由于口沒有*封閉而造成污染。

- 同一移液管交叉污染多瓶細胞。

- 血清，非正規來源，潛在病毒和支原體污染

1.細菌：

細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀，不同的細菌類型，可有不同的外形，培養液一般會快速渾濁變黃，有時候有異味，對細胞生長影響明顯。

預防及補救措施：

• 使用LabServ系列耗材，已無菌無熱源處理。

• 可在培養液中加相應的抗生素處理，例如雙抗青霉素，鏈霉素。或者四環素，慶大霉素。

• 嚴格無菌操作

2. 霉菌：

培養液是清亮的，倒置顯微鏡下無雜質，37度孵箱培養2-3天，仍清亮，但出現絮狀雜質，鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物，可看到明顯的菌絲，細胞仍可生長，但時間長之后，細胞的活力狀態變差。

解決方法：

• 用硫酸銅溶液擦拭培養箱，再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅。或者在培養箱的托盤加入飽和的消毒磷酸氫二鈉高鹽液體,可以防止霉菌污染。

• 被霉菌污染后，可把所有細胞暫時轉移，采用過氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把過氧乙酸放置在孵箱內一個小時，使其蒸汽彌漫。待過氧乙酸的氣味消散后，再移入細胞。預防霉菌污染，可在培養基里加3u/mL的兩性霉素或制霉菌素或放線菌素D或雙抗。

3. 支原體：

黑色的，好象多為多形,光學顯微鏡很難觀察到，國內血清很多都沒有做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中比較常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細胞以后，細胞病變不很明顯，只是慢慢si去。

解決方法：

• 支原體污染細胞后，特別是重要的細胞株，有必要清除支原體，常用方法有：抗生素處理、抗血清處理、抗生素加抗血清和補體聯合處理。要注意的是：支原體沒有細胞壁，故作用于細胞壁生物合成的抗生素，如內酰胺類、萬古霉素等是不敏感的；對多粘菌素、利福平、磺胺藥物普遍耐藥。對支原體有抑制活性抗生素是四環素類、大環內酯類等，氨基糖苷類、氯霉素對支原體有較小的抑制作用。必要時更換所有培養用物。通常，濾過除菌的方法對支原體是沒有作用的。

4. 真菌：

一般培養液清亮，不變色，鏡下有絲狀物，有些真菌開始很像死細胞碎片，只是它很多很多的小塊很清楚，象珊瑚狀，不象細胞碎片分不清，慢慢的會長出很細的黑色絲狀物。真菌生長的比較慢，不象細菌那么容易被發現，但是一旦發現有它的存在細胞就被污染了，也很難救活了。

解決方法：

• 果斷扔掉，然后*消毒滅菌培養間，CO2培養箱，器皿和培養液。