一、細胞基本屬性

組織來源：頸靜脈組織

種屬來源：大鼠

細胞簡介：頸靜脈存在于脊椎動物頸部的靜脈。血管內皮細胞層是血液和其它組織的天然屏 障。  內皮細胞同時會合成和分泌凝血和纖維蛋白溶解系統的增強和抑制物 ，以及 影響血小板粘附和聚集的媒介物。  它們同時也會分泌控制細胞增殖的蛋白來維持 血管壁的健康。  內皮細胞會分泌t-PA和PAI-1等抗血栓因子以及響應TNF-α ，繼 而分泌細胞因子GM-CSF ，表達ICAM-1表面抗體 ，產生大量的一氧化氮和         endothelin。原代靜脈內皮細胞的體外培養系統有助于在特定的體外條件下研究 血管內皮細胞的功能。

培養基：原代內皮細胞培養體系

換液頻率:每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態：梭形 ，多角形細胞

傳代特性：根據細胞特性

消化液：0.25%胰dan白酶

培養條件：氣相：空氣 ，95%；  CO2 ，  5%

二、細胞培養狀態

發貨時發送細胞電子版照片

三、使用方法

大鼠頸靜脈內皮細胞是一種貼壁細胞，細胞形態呈梭形 ，多角形細胞，在技術部標準操作流程下，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。

客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。

1. 取出T25細胞培養瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養瓶傳代，然后補充新鮮的培養基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養；

4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內加入5ml培養基終止消化；

3)經1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養基重懸沉淀，接種于新的培養瓶內；

4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基(37℃預熱)。

5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。

四、注意事項

1. 培養基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細胞培養過程中，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養過程中，消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和技術部溝通；由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

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