41102ES Lentiviral Packaging Kit
- 公司名稱 翌圣生物科技（上海）股份有限公司
- 品牌 Yeasen/翌圣生物
- 型號 41102ES
- 產地
- 廠商性質 生產廠家
- 更新時間 2025/7/16 13:01:05
- 訪問次數(shù) 864
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企業(yè)簡介
翌圣生物科技（上海）股份有限公司【Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd.】是一家以蛋白質改造和酶進化技術為驅動，聚焦生命科學產業(yè)鏈上游核心原料，從事分子、蛋白和細胞三大品類生物試劑的研發(fā)、生產與銷售的高新技術企業(yè)，通過打通分子酶、蛋白、抗體、核酸、細胞的技術開發(fā)路徑，成為國內少數(shù)同時覆蓋三大品類生物試劑、兼?zhèn)浜诵募夹g自主研發(fā)能力和規(guī)模化生產能力的高新技術企業(yè)，產品廣泛應用于生命科學研究領域、診斷與檢測領域和生物醫(yī)藥領域。
主營業(yè)務
公司憑借在蛋白質改造和酶進化領域的技術優(yōu)勢和深耕生物試劑行業(yè)多年積累的豐富經驗，構建了品質優(yōu)良、類型齊全、種類豐富的產品管線。自公司成立以來，公司研發(fā)、生產和銷售的生物試劑超過3000種，涵蓋分子、蛋白、細胞三大品類的生物試劑，能夠滿足客戶多種類型生物試劑的一體化采購需求。公司核心產品覆蓋qPCR系列、NGS系列、逆轉錄系列、核酸提取與純化系列、PCR系列、分子克隆系列、體外轉錄系列、抗體、蛋白純化系列、蛋白分析系列、重組蛋白、細胞分析系列、細胞培養(yǎng)系列、細胞轉染系列、報告基因檢測系列等多個品類的生物試劑，廣泛應用于生命科學研究、診斷檢測和生物醫(yī)藥等領域。
發(fā)展歷程
榮譽資質
翌圣生物通過申請商標和軟件著作權的方式保障核心技術和市場競爭力，不斷加強公司品牌建設。截至2022年3月31日，公司已經獲得授權18項（其中發(fā)明14項、實用新型1項、外觀設計3項）和45項與生物試劑相關的軟件著作權，擁有經國家知識產權局商標局核準的注冊商標權37項以及4項境外注冊商標，是國家高新技術企業(yè)和上海市專精特新企業(yè)。
創(chuàng)新平臺
經過多年的產品研發(fā)技術經驗的沉淀以及持續(xù)的研發(fā)創(chuàng)新，翌圣生物積極開展“產學研”合作，與擁有生物催化與酶領域國家重點實驗室的湖北大學、擁有教育部工業(yè)生物領域重點研究基地的江南大學展開合作，優(yōu)化生物試劑關鍵原料的生產和表達工藝。翌圣生物以基因工程技術、生物信息技術、細胞生物學技術、免疫學技術、生化分析技術等生命科學領域的共性生物技術為基礎，建立了六大核心技術平臺——雙向分子酶理性設計與定向進化平臺、密度發(fā)酵與超潔凈純化平臺、分子診斷試劑關鍵原料研發(fā)平臺、高通量測序建庫試劑創(chuàng)新研發(fā)平臺、高性能單克隆抗體研發(fā)平臺和mRNA醫(yī)藥應用研發(fā)平臺，目前已經自主研發(fā)出20項核心技術，打通分子酶、蛋白、抗體、核酸、細胞的技術開發(fā)路徑，覆蓋技術研發(fā)、產品升級、規(guī)模生產和質量控制等生物試劑研發(fā)和生產的各關鍵環(huán)節(jié)。
工業(yè)化生產
翌圣生物擁有按照準GMP 標準建設運營的工業(yè)化生產基地，配有噸級發(fā)酵線、工業(yè)級 AKTA 純化線和全自動包裝線。同時，公司通過了ISO 13485:2016質量管理體系認證，從原料控制、生產管理、質檢管控、倉儲運輸?shù)葘ιa線進行360度管理監(jiān)督，保證產品過程的可控制性及可追溯性，竭盡全力為您提供可靠的產品。
客戶服務
翌圣生物憑借優(yōu)質穩(wěn)定的產品質量、高效及時的響應能力、快速穩(wěn)定的交付能力和周到完備的售后服務獲得了眾多科研用戶和工業(yè)用戶的認可，為檢測公司、治療公司、工具類公司和科學研究實驗室提供應用于科學研究、體外診斷、基因測序、生物醫(yī)藥等的生物試劑。與中國科學院、清華大學、北京大學、復旦大學、上海交通大學、浙江大學等頂尖科研院所和華大基因、恒瑞醫(yī)藥、藥明康德、之江生物、圣湘生物、斯微生物、金斯瑞、思路迪等工業(yè)客戶建立了穩(wěn)定、緊密的合作關系，公司產品被多次使用在Nature、Science、Cell等國際頂級期刊論文發(fā)表中。
公司企業(yè)文化
幫助客戶創(chuàng)造價值，讓世界更健康更快樂
◎ 成為生命科學工具領域全球Top⑩
◎ 具備驅動產業(yè)變革的技術創(chuàng)新能力
◎ 擁有一支持續(xù)學習型的翌圣鐵軍
翌圣生物始終秉承“幫助客戶創(chuàng)造價值，讓世界更健康更快樂”的使命，專注于技術創(chuàng)新和產品升級，不斷拓展核心技術的應用領域，為客戶提供更為的產品與服務，助力我國打造自主可控的生物試劑產業(yè)鏈。同時，翌圣生物將進一步推進國際化戰(zhàn)略，繼續(xù)布局和拓展海外市場，為全球生物試劑產業(yè)發(fā)展貢獻力量。
分子生物學試劑，細胞生物學試劑，免疫學試劑，蛋白組學試劑等
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 貨號 | 41102ES |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產業(yè) |
翌圣慢病毒包裝試劑盒（Lentiviral Packaging Kit）由優(yōu)化的慢病毒包裝輔助質粒混合物（Lentiviral Mix）、表達eGFP蛋白的對照質粒和高效轉染試劑（HG TransgeneTM Reagent）組成，可以兼容第二代和第三代的慢病毒包裝質粒，且具有慢病毒包裝時間周期短（一周之內即可拿到純化好的高滴度慢病毒）、病毒滴度高的優(yōu)勢，可應用于針對不同基因和藥物靶標的臨床前細胞學實驗和整體動物實驗。非常適合于病毒包裝初試者。
產品組分
| 類別 | 組分編號 | 組分名稱 | 儲存 | 產品編號/規(guī)格 | ||
| 41102ES10（10T） | 41102ES20（20T） | 41102ES40（40T） | ||||
| Part Ⅰ | 41102-A | Lentiviral Mix(1 μg/μL) | -25~-15℃ | 100 μL | 200 μL | 400 μL |
| 41102-C | eGFP 對照質粒（Amp+） | -25~-15℃ | 1.5 μg | 1.5 μg | 1.5 μg | |
| Part Ⅱ | 41102-B | HG TransgeneTM Reagent | 2~8℃ | 0.6 mL | 1.2 mL | 2×1.2 mL |
慢病毒包裝所需其他材料（選用）
1）DMEM：Yeasen
2）FBS：Yeasen
3）Penicillin-Stretomycin：Yeasen
4）HEK 293T/293FT：慢病毒包裝及低度檢測所用工具細胞（HEK293T）
5）Antibiotics：Yeasen 用于穩(wěn)定轉染細胞株篩選，如Puromycin，G418等
6）Competent cells：Yeasen
病毒包裝前的準備
慢病毒表達載體：包含病毒包裝，侵染和將病毒重組基因整合到基因組DNA中以便表達目的基因或者shRNA的基本元件。
DNA溶液的制備：以質粒抽提試劑盒提取慢病毒包裝系統(tǒng)中各種質粒DNA，質粒DNA溶于無菌的TE或ddH2O中，以紫外光吸收法測定其濃度及純度，保證所提質粒DNA 的A260/A280在1.8～2.0之間。
細胞狀態(tài)：良好的細胞狀態(tài)對病毒的包裝至關重要，避免細胞培養(yǎng)基有細菌、真菌或支原體的污染，盡量使用傳代次數(shù)較少的細胞，如果細胞是剛復蘇的話，最好傳兩代之后再包裝。
慢病毒包裝
翌圣生物慢病毒載體表達系統(tǒng)由pGMLV慢病毒載體和Lentiviral Mix質粒組成。pGMLV慢載體中含有HIV的基本元件5’LTR和3’LTR以及其他輔助元件，例如WPRE和cPPT/CTS等。翌圣可以根據(jù)不同的實驗目的針對pGMLV載體改造以進行啟動子活性研究、基因表達研究、RNA干擾等研究。Lentiviral Mix能夠表達病毒包裝需要的各種必需成分如：gag基因，編碼病毒主要的結構蛋白；pol基因，編碼病毒特異性的酶；rev基因，編碼調節(jié)gag和pol基因表達的調節(jié)因子；還含有單純皰疹病毒來源的VSV-G基因，提供病毒包裝所需要的包膜蛋白，可以兼容第二代和第三代的慢病毒包裝質粒。
使用流程
制備編碼慢病毒顆粒的重組病毒質粒及其輔助包裝原件載體質粒，重組質粒載體和輔助質粒載體分別進行高純度無內毒素抽提，使用HG TransgeneTM Reagent進行共轉染293T細胞，轉染后18 h 更換為完quan培養(yǎng)基，培養(yǎng)48 h后，收集富含慢病毒顆粒的細胞上清液，對其濃縮后得到高滴度的慢病毒濃縮液，在293T細胞中測定病毒滴度。在一定滴度范圍內的慢病毒顆粒可以滿足大部分體內體外實驗需求。
1）293T細胞分盤：轉染前一天，將已經長好的細胞以合適比例傳代到10 cm培養(yǎng)皿中，當細胞長到~80%時準備轉染。
2）轉染前換液：轉染前1~2 h 將需要轉染的細胞換新鮮的培養(yǎng)基，12 mL/10 cm皿。注意：293T細胞貼壁性不是很好，換液時應小心滴加盡量避免沖起細胞。
3）轉染：取無菌的1.5 mL EP管或15 mL離心管，按下列組分配制反應體系：
| 無血清DMEM | 1 mL |
| DNA | 10 μg |
| Lentiviral Mix | 10 μL(10 μg) |
| HG TransgeneTM Reagent | 60 μL |
混勻后，室溫放置18 min~20 min后，均勻滴加到提前換過液的培養(yǎng)皿中，后置于CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4）換液：轉染18~20 h后，小心吸掉細胞培養(yǎng)液棄于盛有消毒液的廢液杯中（注意：此時培養(yǎng)基中已含有少量的病毒，必須經處理后才能丟棄，所用的移液槍頭等必須經消毒液浸泡處理后才能丟棄），然后加15 mL新鮮的培養(yǎng)基（也可根據(jù)實驗要求換為無血清的DMEM）繼續(xù)培養(yǎng)。
5）病毒收集：換液48 h后，吸取細胞上清液于50 mL離心管，4℃，500 g離心5 min，上清液用0.45 μm濾器過濾后轉移到新的離心管中。此時上清液中的病毒顆粒可以直接去檢測滴度或者感染目的細胞，如果對病毒的滴度及純度有較高要求，可對上清液進行濃縮與純化。
6）病毒分裝與保存：將病毒以40~50 μL分裝，后保存于-80℃。
冰袋運輸。HG TransgeneTM Reagent（41102-B）2~8 ℃保存，其余組分（41102-A、41102-C）均于-25~-15℃保存，有效期1年半。
Q:慢病毒包裝試劑盒中是否含有 pGMLV 慢病毒載體？穩(wěn)轉怎么篩選？還需要再額外購買其他質粒嗎？
A: 含有該載體；穩(wěn)轉篩選所用為Puromycin，G418；后期分選為熒光篩選；只需要客戶另外準備目的質粒。
Q: 慢病毒包裝試劑盒中 pGMLV 慢病毒載體，有質粒（陽性對照）序列嗎？
A: 慢病毒包裝，一般用三質粒或者四質粒系統(tǒng)，分別構建病毒的不同組件，我們的慢病毒包裝試劑盒，提供陽性對照的質粒，但是：
（1）質粒序列都不提供；
（2）質粒的酶切位點不能提供。
Q: 為什么容易個試劑盒包裝的病毒感染成功了，有的卻感染不成功？
A:
①質粒構建有問題，如果不是同一個質粒，可以質粒測序確定質粒是否正確，是否有移碼或者脫靶問題；
②如果質粒沒問題，可能是慢病毒載體不正確導致病毒包裝不成功，我們試劑盒是兼容二代，三代的慢病毒載體；
③如果以上兩種都沒問題，可能是感染的細胞是懸浮細胞或者是貼壁不牢的細胞，可以使用聚凝胺增加病毒感染率或者是使用腺病毒包裝。
Q: 轉染試劑放-20了，還可以再用嗎？
A: 不建議用了，轉染試劑是脂質體的，不能冰凍。
Q: 慢病毒包裝試劑盒中陽性對照：eGFP 對照質粒（Amp+）的推薦引物序列是什么？
A: GFP-qF:TGTTCACCGAGTACCCCCAG；GFP-qR:CGCCGTAGAACTTGGACTCG。
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