掃描電鏡（SEM）檢測服務

一、實驗技術簡介

掃描電鏡（Scanning Electron Microscope；SEM）是介于透射電鏡和光學顯微鏡之間的一種微觀性貌觀察手段，可直接利用樣品表面材料的物質性能進行微觀成像。掃描電鏡的優點是，有較高的放大倍數，20-20萬倍之間連續可調；有很大的景深，視野大，成像富有立體感，可直接觀察各種試樣凹凸不平表面的細微結構；試樣制備簡單。 目前的掃描電鏡都配有X射線能譜儀裝置，這樣可以同時進行顯微組織性貌的觀察和微區成分分析，因此它是當今十分有用的科學研究儀器。
 

二、實驗技術原理
掃描電鏡是在加速高壓作用下將電子槍發射的電子經過多級電磁透鏡 匯集成細小的電子束。在末級透鏡上方掃描線圈的作用下,使電子束在試樣表面做光柵掃描(行掃+幀掃)。入射電子與試樣相互作用會產生二次電子、背散射電 子、X射線等各種信息。這些信息的二維強度分布隨試樣表面的特征而變(這些特征有表面形貌、成分、晶體取向、電磁特性等等),將各種探測器收集到的信息按 順序、成比率地轉換成視頻信號,再傳送到同步掃描的顯像管并調制其亮度,就可以得到一個反應試樣表面狀況的掃描圖像。如果將探測器接收到的信號進行數字化 處理即轉變成數字信號,就可以由計算機做進一步的處理和存儲。

三、實驗操作流程

1、取材

2、固定

3、漂洗

4、脫水

5、置換

6、干燥

7、鍍膜

8、掃描電鏡觀察，拍片

四、實驗注意事項

1、客戶提供

  1）細胞，數量要求：10^6次方以上。生長在培養皿或培養板上細胞取材，若是懸浮的細胞將細胞轉移到尖底 EP管里直接離心，貼壁細胞就先倒出培養液，用胰蛋白酶消化或用細胞刮刮下，而后帶培養液一起低速離心，800-1200 轉/分鐘，離心 5-10 分鐘使細胞沉淀成團，離心完后倒出培養液，沿壁緩慢加入電鏡固定液（1.5%-2.5%中性戊二醛），注意不要把細胞團打散。4℃下固定 15 分鐘或以上再送檢。若細胞團太小，注意要用1ml 甚至 0.5ml 尖底 EP 管來進行固定、保存。

  2）肌肉：觀察縱切面時沿著肌束方向，用鋒利的刀片或剪刀在取出的組織一邊取出 1-3 條細長的肌束，橫截面約 1mm*1mm，投入到 2-8℃的電鏡固定液（2.5%中性戊二醛）里。若有條件，為防止肌肉收縮變形，可將取出的肌束貼在載玻片毛玻璃一側，使其略微伸展。再將貼好標本的載玻片放入戊二醛中進行固定。若無，則可取出長條狀組織后，垂直緩慢放入固定液中，懸空在固定液里稍等 3 秒再放入。
 

  3）植物、昆蟲等密度比固定液低的樣品：必須先用針筒或抽真空儀器先抽氣，再使標本沉入固定液中。

2、交付標準

  1）掃描照片、讀片分析

  2）完整項目報告（材料、試劑、儀器、方法、數據分析、實驗結果）
 

3、其他

1、含有水分的樣品（多孔/鑲樣樣品）應先烘干除去水分。

2、表面受到污染的試樣，要在不破壞試樣表面結構的前提下進行適當清洗，然后烘干。 

3、新斷開的斷口或斷面，一般不需要進行處理，以免破壞斷口或表面的結構狀態。有些試樣的表面、斷口需要進行適當的侵蝕，才能暴露某些結構細節，則在侵蝕后應將表面或斷口清洗干凈，然后烘干。

4、對磁性試樣要預先去磁，以免觀察時電子束受到磁場的影響。

5、對同一種鍍膜材料，離子濺射鍍膜質量好，能形成顆粒更細、更致密、更均勻、附著力更強的膜。

6、同一次裝入電鏡的樣品，高度差不要超過1.5mm（包括同一塊樣品的表面高度也是如此）。對鑲嵌塊，斷面樣品等高度大的樣品，千萬不要對樣品臺平面聚焦，只能對樣品上表面聚焦。