白細胞抗原B27 ELISA KIT

上海拜力生物白細胞抗原B27 ELISA KIT品牌代理經營進口胎牛血清、細胞因子、ELISA試劑盒、細胞、抗體、生物試劑、耗材、培養基、一抗、二抗、其產品吸附均勻，吸附性好，空白值低，孔底透明度高，代做ELISA實驗等。完善的庫存及供應體系以及高效穩定的純化技術，保證產品均能現貨供應和產品質量的穩定性。

怎樣查到一個特定細胞株的相關知識和培養條件？
ATCC（American Type Culture Collection）收集了絕大多數細胞的詳細資料。打開ATCC網頁的Cells and hybridomas鏈接，輸入細胞名稱就可以搜索ATCC的細胞數據庫。數據庫中有每一種細胞的詳細描述，包括細胞的來源，培養和凍存條件，以及相關文獻等資料。
如何選用特殊細胞系培養基？
培養某類型細胞沒有固定的培養條件。MEM中培養的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣容易生長。總之，*MEM、DMEM做貼壁細胞培養；RPMI1640做懸浮細胞培養；各種目的無血清培養*AIMV培養基（SFM）。

測序實驗流程：
1 收集樣品
2 相關試劑 總RNA提取試劑TREzol Reagent (RNA提取試劑), M-MLV(cDNA逆轉錄酶), RNA 純化試劑, RealqPCR MasterMix (熒光定量PCR預混試劑)。
3 實驗儀器 熒光定量PCR儀; PCR儀;低溫離心機。
4 總RNA提取
5 cDNA合成 在0.5ml的離心管中加入1µl模板總RNA(1µg/µl); 2µl隨機引物(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加水至15µl體系。混勻后70℃變性RNA 5分鐘，冰上速冷1分鐘，離心將溶液收集至管底加入6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加水至30µl體系。PCR儀中反應條件設置 37℃延伸60min，70℃保溫15min終止反應。合成好的cDNA置于 -20 ℃保存備用。
6 引物設計與thermal cycler protocol thermal cycler protocol合成
7 實時定量PCR 按以下反應體系進行: 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2、dNTP mix including dUTP)25ul;上游引物F 1 ul，下游引物R 1 ul;cDNA template 2ul。定量PCR儀擴增反應條件設置:50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個循環)。
8 PCR產物溶解曲線分析 將所擴增的PCR 產物進行溶解曲線分析，單峰溶解曲線表示擴增產物單一，無非特異性擴增產物。溶解曲線生成的反應程序為: 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。

 注意事項：收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定，對收集后當天進行檢測的標本，儲存在4℃備用，如有特殊原因需要周期收集標本，將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復凍融，標本2-8℃可保存48小時，-20℃可保存1個月，-70度可保存6個月，部分標本需添加抑肽酶。

細胞出現問題，可重發的情況有哪些？判定標準是什么？
　　（1）細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、破損、漏液等，重發；
　　（2）凍存的細胞復蘇后，絕大多數細胞未存活，重發；
　　（3）存活的細胞靜置24小時后，絕大多數細胞未存活，重發；
　　（4）凍存的細胞復蘇后或存活的細胞靜置4小時后并且未開封，出現污染，重發；
　　（5）視具體情況而定。
細胞出現問題，不予以重發的情況有哪些？
　　（1）客戶造成細胞污染，不重發；
　　（2）客戶不正確操作致細胞狀態不好，不重發；
　　（3）細胞狀態不好，未提供細胞培養前3天照片的，不重發；
　　（4）細胞培養時經其它處理的，不重發；
　　（5）細胞收到2天內，未告知，不重發；
　　（6）視具體情況而定。