酶聯(lián)免疫檢測試劑盒DRGT
- 公司名稱 上海研生實業(yè)有限公司
- 品牌 Wako/和光純藥
- 型號
- 產(chǎn)地 進(jìn)口
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時間 2025/4/30 14:14:18
- 訪問次數(shù) 730
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 制藥/生物制藥 |
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酶聯(lián)免疫檢測試劑盒原理:
酶聯(lián)免疫檢測試劑盒DRGT采用雙抗體夾心法測定人雄激素結(jié)合蛋白(ABP)水平。用純化的人雄激素結(jié)合蛋白(ABP)抗體包被微孔板,制成固相載體,實驗時依次在微孔板中加入樣本及標(biāo)準(zhǔn)品,并加入HRP標(biāo)記的ABP抗體,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,反復(fù)洗滌后加底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色,再用硫酸終止反應(yīng),轉(zhuǎn)變成黃色。顏色的深淺和樣品中的ABP含量呈正相關(guān)。采用酶標(biāo)儀在450nm波長測定吸光度(OD值),根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,計算測試樣品中ABP濃度。
實驗材料與試劑配制:
1. 儀器與材料:酶標(biāo)儀(使用前預(yù)熱30分鐘),微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水,濾紙。
2. 緩沖液使用:加5ul的緩沖液于50ul的樣品中,如果樣品量不夠或者不確定,緩沖液和樣品的混合比例不要小于1:10即可。混勻,靜置1小時備用(如果標(biāo)本是血清或者血漿,此步驟忽略)。
3. 洗液的配制:按1:100的比例配制洗液備用。
樣品收集、處理及保存:
1. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:適用于檢測體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份。用無菌管收集細(xì)胞上清液,以1000×g離心15分鐘,收集上清。
2. 細(xì)胞:用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次,調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到104-106/ml左右,通過反復(fù)凍融,使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,或者細(xì)胞超聲粉碎,離心取上清液檢測。
3. 血清:在室溫下,血液自然凝固,以1000×g離心15分鐘,取上清待測。
4. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合后靜置10-20分鐘后,以1000×g離心15分鐘,收集上清。
5. 體液:包括胸腹水、腦脊液,分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集,以1000×g離心15分鐘,收集上清。
6. 組織標(biāo)本:切取組織標(biāo)本,稱取重量0.5mg,加入500ul的PBS,用手工或勻漿器,或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿,以2000-3000rmp離心20分鐘,收集上清進(jìn)行檢測。
7. 樣品中不能含有NaN3,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
8. 保存:如果樣品不能立即檢測,應(yīng)將其分裝,-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
酶聯(lián)免疫檢測試劑盒DRGT操作步驟:
1. 取出試劑盒,室溫(20-25℃)放置30分鐘。
2. 分組:取出96孔板,根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組(6個濃度)、空白孔、待測樣品組。
注:為減少實驗誤差,保證準(zhǔn)確性,建議設(shè)置復(fù)孔。
3. 加樣:依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入50ul的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中;空白對照孔加入50ul的蒸餾水;其余微孔中加入 50ul的待測樣本。
4. 加酶標(biāo)溶液:標(biāo)準(zhǔn)品組、待測樣本組各孔中加入100ul 的酶標(biāo)溶液(空白對照孔除外)。
5. 溫育:酶標(biāo)板用封板紙密封后,放入濕盒內(nèi)于37℃恒溫孵育1小時。
6. 洗板:用稀釋后的洗滌液注滿每孔,靜置15-30s,充分清洗酶標(biāo)板5次,用吸水紙拍干。
7. 顯色:各孔加入顯色劑A液50ul后,再加入顯色劑B液50ul。
8. 終止:25-37℃下避光反應(yīng)10-15分鐘,加入50ul終止液。
9. 讀板:在450nm波長讀取各孔的OD值。
注:讀板時必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡,讀板時間控制在終止反應(yīng)后的30分鐘內(nèi),以免影響準(zhǔn)確性。