Hep-3B人肝癌細(xì)胞系
Hep-3B人肝癌細(xì)胞系源于人體肝細(xì)胞癌組織,作為肝癌研究領(lǐng)域的經(jīng)典模型,在探索腫瘤奧秘與開發(fā)抗癌策略中扮演關(guān)鍵角色。光學(xué)顯微鏡下,Hep-3B 細(xì)胞呈現(xiàn)多邊形或不規(guī)則形態(tài),緊密貼附于培養(yǎng)瓶底部,常聚集成多層細(xì)胞簇,形似 “微型腫瘤”。細(xì)胞胞質(zhì)豐富,經(jīng) HE 染色后呈強(qiáng)嗜酸性,內(nèi)含大量異常增殖的線粒體,其數(shù)量較正常肝細(xì)胞高出 3 倍,為癌細(xì)胞feng狂增殖提供充足能量;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張變形,參與合成大量促癌蛋白。細(xì)胞核大而畸形,核質(zhì)比高達(dá) 0.7(正常肝細(xì)胞約 0.4),核仁數(shù)目增多至 2 - 3 個(gè),部分細(xì)胞出現(xiàn)雙核、多核現(xiàn)象,異常核分裂象頻率達(dá) 15%,遠(yuǎn)超正常細(xì)胞水平。
Hep-3B 細(xì)胞的生物學(xué)特性ji具研究價(jià)值。增殖調(diào)控方面,其細(xì)胞周期關(guān)鍵蛋白 Cyclin D1 表達(dá)量較正常肝細(xì)胞上調(diào) 4.2 倍,持續(xù)激活 CDK4/6 激酶,推動(dòng)細(xì)胞周期從 G1 期向 S 期異常進(jìn)展,細(xì)胞倍增時(shí)間僅 24 - 36 小時(shí)。信號(hào)通路層面,Wnt/β-catenin 通路異常激活,β-catenin 蛋白在細(xì)胞質(zhì)中累積量增加 2.8 倍,入核后激活 MYC、CCND1 等下游基因轉(zhuǎn)錄;PI3K/AKT 通路的激活使 AKT 磷酸化水平提升 3.5 倍,通過抑制 Bad、激活 mTORC1,顯著增強(qiáng)細(xì)胞存活與代謝能力。侵襲轉(zhuǎn)移特性上,Hep-3B 細(xì)胞分泌的 MMP-2、MMP-9 酶活性分別是正常肝細(xì)胞的 6 倍和 8 倍,可快速降解細(xì)胞外基質(zhì)成分;細(xì)胞表面整合素 αvβ3 表達(dá)量上調(diào) 5 倍,增強(qiáng)細(xì)胞與基底膜的黏附 - 脫離能力,加速癌細(xì)胞遷移。此外,研究發(fā)現(xiàn) Hep-3B 細(xì)胞對索拉非尼的耐藥指數(shù)達(dá) 3.2,為解析肝癌耐藥機(jī)制提供理想模型。
培養(yǎng) Hep-3B 細(xì)胞需精準(zhǔn)把控關(guān)鍵環(huán)節(jié)。采用含 10% 特級胎牛血清的高糖 DMEM 培養(yǎng)基,配合 1% 雙抗(青mei素 - 鏈mei素),在 37℃、5% CO?培養(yǎng)箱中維持優(yōu)良生長狀態(tài)。當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá) 85% 時(shí),用 0.25% 胰dan白酶 - EDTA 溶液消化,嚴(yán)格控制消化時(shí)間在 2 - 3 分鐘,傳代比例 1:3 - 1:4。凍存時(shí)使用 90% 胎牛血清與 10% DMSO 凍存液,經(jīng)程序降溫后置于液氮保存。培養(yǎng)過程中,每周需檢測細(xì)胞活力(臺(tái)盼藍(lán)染色)、形態(tài)學(xué)特征及標(biāo)志物表達(dá)(AFP、PCNA),確保細(xì)胞特性穩(wěn)定。
在科研應(yīng)用領(lǐng)域,Hep-3B 細(xì)胞系成果斐然。2023 年一項(xiàng)研究通過 CRISPR 技術(shù)敲除 Hep-3B 細(xì)胞的 TP53 基因,發(fā)現(xiàn)其 Wnt/β-catenin 通路活性進(jìn)一步增強(qiáng),癌細(xì)胞干性提升 40%,揭示 TP53 缺失與 Wnt 通路激活的協(xié)同促癌機(jī)制。藥物研發(fā)方面,新型 MEK 抑制劑 U0126 在 Hep-3B 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中,可顯著抑制 ERK 磷酸化,使細(xì)胞增殖抑制率達(dá) 78%,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡率提升至 35%。針對耐藥問題,聯(lián)合使用索拉非尼與 PI3K 抑制劑 LY294002,可使 Hep-3B 細(xì)胞耐藥性降低 60%,為臨床聯(lián)合用藥提供理論依據(jù)。此外,基于 Hep-3B 細(xì)胞構(gòu)建的 3D 腫瘤球模型,已成功用于評估納米載藥系統(tǒng)對肝癌的靶向治療效果,推動(dòng)肝癌精準(zhǔn)醫(yī)療的發(fā)展。
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