葡聚糖凝膠G-25（Bio-sep G-25）

                     產品說明書

    葡聚糖凝膠是一種具有三維網狀結構的高分子化合物,它是由葡聚糖加入交聯劑環氧氯丙烷通過醚鍵互相交聯聚合而成的，交聯度越大，網孔結構就越緊密，吸水后的體積膨脹就越小，能允許進入凝膠內部的分子的分子量也就越小，反之亦然。層析時，大于凝膠孔徑的大分子，被阻于凝膠相外，沿著凝膠顆粒之間的間隙走，下移速度zui快，故zui先洗脫下來，中分子物質部份進入凝膠內部，洗脫速度為其次，而小分子物質因全部進入凝膠，受到阻力zui大，故zui后被洗脫下來，如此物質得到分離。

 1 化學和物理性質

    葡聚糖凝膠G-25是一種珠狀的凝膠，含有大量的羥基，很容易在水中和電解質溶液中溶脹。型號G表明每克于凝膠吸水量的多少，G-25表明每克干凝脫膠吸水2.5毫升。這表征了凝膠所能膨脹的倍數，亦間接表征了凝膠孔徑的大小。 葡聚糖凝膠的溶脹度基本上不因鹽和洗滌劑的存在而受影響。

1.1 化學穩定性

   葡聚糖凝膠G-25不溶于一切溶劑（除非它被化學降解）。它在水、鹽溶液、有機溶劑、堿和弱酸性溶液中都是穩定的，在強酸中凝膠骨架的糖苷鍵被水解。*接觸氧化劑將破壞凝膠，因而應避免使用。

1.2 物理穩定性

   葡聚糖凝膠G-25并不熔融，可以在濕態、中性PH進行滅菌或在高壓滅菌器120℃、30分鐘而不影響它的色譜性質。干態的凝膠加熱至120℃以上將開始焦糖化。

2 產品說明                                                                                                                  

2.1交聯葡聚糖凝膠微球G-25的排阻極限測定

交聯葡聚糖微球G-25排阻極限

2.2交聯葡聚糖凝膠微球G-25的脫鹽實驗研究

固定上樣量50μl，分別以15, 30, 60, 90 cm/h的流速洗脫，色譜圖如圖所示：

  流速15cm/h，進樣量50μl            流速30cm/h，進樣量50μl

  流速60cm/h，進樣量50μl            流速90cm/h，進樣量50μl

3 使用方法

3.1 乙醇浸泡

  在室溫下，將干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小時，并不斷攪拌以保證凝膠溶脹，用去離子水洗去殘存的乙醇濾干。

3.2 去離子水浸泡

   室溫下，在去離子水中充分溶脹24小時，間隙攪拌，以保證凝膠的*溶脹。

3.3 鹽酸浸泡

   在常溫下再用0.2N HCl浸泡12小時，間隙攪拌，濾干，水洗至中性。

3.4 裝柱

  將溶脹好的凝膠根據裝柱要求一次性置入柱內，注意保持濕態裝柱，并避免柱內產生氣泡或斷層。

3.5 平衡

   上樣前平衡層析柱至少3-5個柱體積直到基線變得平穩為止（流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值）

3.6 上樣

   凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積，我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積，視分離情況可以調整；脫鹽時上樣量可以達到20%的柱床體積，柱高的選擇也與分離要求相關，柱高控制在40-50 cm

以下，過高的凝膠層會引起較大的反壓，應當盡可能避免。難分離物質要有一定柱高和流速控制，脫鹽時高徑比為5：1即可。

3.7 洗脫方法

   可以用去離子水，也可以采用上柱時的緩沖液洗脫；在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化。

3.8 在位清洗（CIP）

凝膠使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床內沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氫氧化鈉反向洗四個柱體積，再以至少三個柱體積平衡緩沖液再生。