通用性DAB 染色試劑盒（鏈霉卵白素-生物素法）RT-SK004

 英文名稱：Universal DAB Detection Kit（Streptavidin-Biotin）

商品名稱：Splink DAB

【包裝規格】

RT-SK004：60人份；

通用性DAB 染色試劑盒（鏈霉卵白素-生物素法）RT-SK004

【預期用途】

本司生產的 DAB 染色試劑盒（鏈霉卵白素-生物素法）適用于檢測小鼠或兔源性一抗，對常規經福爾馬林固定的石蠟切片、冷凍切片及細胞涂片、爬片中的靶抗原進行檢測，適用于生物顯微鏡下觀察。

【檢驗原理】

DAB 染色液（鏈霉卵白素-生物素法）使用生物素化、高親和力的二抗與一抗結合，過氧化物酶標記的鏈霉卵白素與生物素標記的二抗結合。該復合物的過氧化物酶可以催化 DAB 底物，在所識別的抗原位置發生反應生成棕黃色的沉淀。

【主要組成成份】

不同批號染色液各組成成份不可互換使用

本產品未提供如下試劑：二甲苯、乙醇（無水、95%、85%）、蒸餾水、中性樹膠、一抗、陽性質控片、蘇木素、PBS 緩沖液。

【儲存條件及有效期】

2-8℃避光保存,不得凍存。自檢定合格之日起有效期為 12 個月。 使用時，采取單支試劑即拿即用的原則，盒中其余組分在 2-8℃的冰箱保存。單支試劑

在每次使用后，應立即放回盒中。

【樣本要求】

新鮮活檢或外科樣本組織，中性福爾馬林固定或合適固定劑，固定時間8~24小時，參照《臨床技術操作規范 病理學分冊》要求取材、脫水、石蠟包埋并制成蠟塊。 組織切片厚度為 3–5 μm 黏附在防脫處理玻片上，放入 56–60°C 干燥箱中拷片兩個小時后，移出放置冷卻至室溫。

【檢驗方法】

1 檢驗所需儀器、設備

 移液器、免疫組化油筆、干燥箱、計時器、孵育盒、染色架、蓋玻片、生物顯微鏡、洗瓶

2 溶液配置

DAB顯色液：DAB顯色液需要在使用前配制。配制方法：在配備的小試管中依次滴加穩定型DAB緩沖液1ml，穩定型DAB底物50-100μl，穩定型DAB色原50-100μl，以配制DAB顯 色液。配置好的DAB顯色液避光存放，24小時內有效。

3 試驗溫度條件：18-28℃

4 試驗步驟

a) 脫蠟和水化

石蠟切片置于新鮮的二甲苯中，浸泡10分鐘×2次，

除去多余的液體后，置無水乙醇中，浸泡5分鐘×2次；

除去多余的液體后，置95%乙醇中，浸泡2分鐘；

除去多余的液體后，置85%乙醇中，浸泡2分鐘；

自來水沖洗1分鐘； PBS溶液沖洗1分鐘。

b) 抗原修復：參照一抗說明書進行。

c）阻斷內源性過氧化物酶

將抗原修復后的切片用自來水沖洗1分鐘，用油筆圈定玻片上的待測組織區域，PBS溶液沖洗1分鐘×1次。 除去PBS溶液，在油筆圈定的區域內加100μl內源性過氧化物酶阻斷劑，室溫下孵育10分鐘； PBS溶液沖洗1分鐘×3次。

d) 加非特異染色阻斷劑

除去PBS溶液，加100μl非特異染色阻斷劑，室溫下孵育10分鐘。

e) 加抗體

除去非特異染色阻斷劑，加100μl一抗，室溫下孵育60分鐘。 PBS溶液沖洗3分鐘×3次。

f) 加酶標羊抗小鼠/兔IgG聚合物

除去PBS溶液，加100μl酶標羊抗小鼠/兔IgG聚合物，室溫下孵育15分鐘。 PBS溶液沖洗3分鐘×3次。

g) 顯色

除去PBS溶液，加100-200μl新鮮配制的DAB顯色液，室溫下孵育3-5分鐘。

h) 復染

自來水沖洗，加100-200μl蘇木素體細胞染色液（我司產品：RT-S003）孵育10-30秒，或自行配制的蘇木素染色至細胞核淺藍色； PBS溶液或自來水沖洗返藍。

i) 脫水、透明、封片

置85%乙醇中，浸泡3分鐘； 置95%乙醇中，浸泡3分鐘； 置無水乙醇中，浸泡3分鐘； 二甲苯透明；中性樹膠和蓋玻片封片

j）生物顯微鏡閱片

5 結果判斷

該染色液會在相應的抗原存在區域沉淀，出現棕黃色物質。染色結果要由有資質的病理醫生在生物顯微鏡下對染色后切片進行觀察并進行判斷。

【檢驗結果的解釋】

1 抗原修復、孵育時間、溫度的修改或使用其他方法均有可能得出錯誤結果。 

2 在每一次染色過程中，必須有對照實驗同時進行。

3 如果陽性組織對照不能顯示適當的陽性染色，使用者應認為該批次實驗測試樣本的結果無效。

4 若酶標羊抗小鼠/兔IgG聚合物孵育溫度過高或孵育時間過長，可能導致染色過強及背景染色。

【檢驗方法的局限性】

 染色前，實驗中的任一環節的不當操作都有可能影響zui終的實驗結果。

【產品性能指標】

1 pH 值：非特異染色阻斷劑和酶標羊抗小鼠/兔 IgG 聚合物 pH 值為 7.4±0.2；穩定型 DAB緩沖液 pH 值為 7.6±0.2。

2 染色效果：用六種不同的一抗，配合相應的陽性對照片進行染色，六張陽性片中的特定細胞位置應觀察到黃色或棕黃色著色，且無背景染色。同時，不使用一抗，直接使用染色液在以上六張陽性片上進行染色，六張陽性片上未觀察到任何黃色或棕黃色著色。

3 批內差：取同一批次的產品，檢測以上六種抗體同一來源的陽性對照片，同一來源的三份陽性對照片中特定細胞位置上觀察到黃色或棕黃色著色，且顏色無明顯差異，同時無背景染色。

【注意事項】

1 本染色液僅用于染色，不做其它用途。

2 本染色液*專業人員使用。

3 應用適當的防護措施，以避免試劑同皮膚和眼睛接觸。

4 染色液中的 DAB 色原為可疑致癌物質，操作中應采用合理的防護措施。

6 若將本染色液中的組分與其他公司的產品混合使用，在染色過程中可能出現異常情況。

7 超過有效期的試劑活性可能降低，因此不得使用過期的染色液。

8 脫蠟不*，容易影響染色結果，建議免疫組化切片脫蠟與常規HE脫蠟分開。

9 為防止可能出現的假陽性、假陰性結果，在實驗過程中需設置陽性與陰性對照。

10 操作中滴加試劑時，過多的PBS緩沖液未瀝干致使試劑被稀釋，將引起染色強度變弱， 因此，滴加試劑前應除去多余的緩沖液。

11 使用中所產生的各種廢棄物都應按《醫療廢物管理條例》處理