BCA蛋白濃度測定試劑盒(增強型)

1.產品簡介：

BCA蛋白濃度測定試劑盒(增強型) 超敏感，zui低檢測濃度為 0.5 μg/ml。線性范圍在 0.5～20 μg/ml，尤其適用于低濃度的樣品。對大多數離子型和非離子型去污劑不敏感，但對Cu的還原劑和螯合劑敏感。比 Lowry 法更加簡單快捷，60 min內完成測定。試劑穩定，室溫可以放置兩年，工作液 1 天內有效。終產物穩定，檢測不同蛋白質分子的變異系數遠小于考馬斯亮藍法蛋白定量。zui短可以檢測雙肽，所以適合于分子量較小的蛋白質，而 Bradford 法需要一定大小的蛋白質。有常規（普通試管）和微量（96 孔板）兩種檢測模式。

2.包裝清單：

3.保存條件：本產品需4°C保存（BSA 標準品需要-20°C保存），有效期一年。

4.使用說明：

4.1 標準品以及工作液的制備:

A. 牛血清白蛋白標準品稀釋液的制備

表1. 牛血清白蛋白標準品稀釋液的制備

B. 微量BCA工作液的制備

1) 使用下列公式計算出所需工作液的總體積：

(標準孔數 +待測樣品孔數) × (重復數) × (每個樣品孔的工作液體積) = 所需工作液的總體積

例如: 標準的試管測定每個樣品需要3個不同的稀釋度和2次重復

(8個標準孔 + 3個待測樣品孔) × (2重復) × (1 ml) = 22 ml BCA工作液 (可以多配到25 ml)

2) 配制 BCA 工作液：

先將溶液A溶液B 和溶液C 按50：48：2 的比例混合，所得溶液即工作液。比如：5 ml 溶液A + 4.8 ml 溶液B +200 μl 溶液C。

4.2 測定：

A. 微孔板測定法

1) 吸取150 μl的標準品及適當稀釋的未知樣品分別至微孔板中。

2) 滴加150 μl的工作液到每孔中并充分混合30 s。

3) 蓋上微孔板并在37°C孵育2 h或60°C放置1 h。

4) 微孔板冷卻至室溫。

5) 在讀數儀器中測量562 nm時的吸光值。

6) 用562 nm時所有的單個標準品和未知樣品的吸光值減去562 nm時空白標準品的平均吸光值。

7) 用每個BSA標準品經562 nm時的空白孔校正過的平均讀數和其相對應濃度(μg/ml)繪制標準曲線。然后再用該標準曲線判斷每個待測樣品的蛋白濃度。

B. 試管測定法

1) 吸取1.0 ml的標準品及適當稀釋的未知樣品分別至對應標記的檢測管中。

2) 滴加1.0 ml的工作液至每管中并充分混合。

3) 蓋上檢測管并于60°C水浴孵育1 h。

4) 所有試管冷卻至室溫。

5) 將分光光度計設置至562 nm，調零。然后在10 min內測量所有樣品的吸收值。

6) 用562 nm時所有的單個標準品和未知樣品的吸光率減去562 nm時空白標準品的平均吸光率。

7）用每個BSA標準品經562 nm時的空白孔校正過的平均讀數和其相對應濃度(μg/ml)繪制標準曲線。然后再用該標準曲線判斷每個待測樣品的蛋白濃度。

5.注意事項：

1）在試管檢測法中，每個樣品需要1 ml的工作液，在微孔板檢測中，每個樣品需要150 μl的工作液。

2）試劑C剛加入到試劑A和試劑B中時，會產生渾濁并迅速消失呈清綠色溶液。制備足夠體積的工作液以檢測相應數量的樣品。工作液在室溫密閉容器內，一天內可保持穩定。不需要避光保存。

3）試管測試法時，試管冷卻至室溫后樣品依然會繼續顯色。但是，在室溫時的顯色比例已經很低，在10 min內檢測到的吸收值一般都不會有太大誤差。

*本試劑僅供實驗室研究使用