RIPA裂解液（弱）

1.產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

    我們生產(chǎn)的RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western、IP等。RIPA裂解液(弱)的主要成分為50 mM Tris (pH 7.4)，150 mM NaCl，1% NP-40，0.25% sodium deoxycholate，以及sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多種抑制劑，可以有效抑制蛋白降解。用RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用我們生產(chǎn)的BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(WB0201/WB0202)測(cè)定蛋白濃度。由于含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford法測(cè)定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。

2. 包裝清單：

3. 保存條件：本產(chǎn)品4℃保存，一年有效。

4. 使用方法:

A. 對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞樣品：

取適當(dāng)量的RIPA裂解液混勻，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的zui終濃度為1 mM。

B. 對(duì)于貼壁細(xì)胞樣品：

去除培養(yǎng)液用PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍。加入適量裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。輕輕的搖晃約5-10 min。充分裂解后，10000-14000g離心10 min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)操作。

表--裂解液用量說(shuō)明： 用于不同規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)板裂解液容量

C. 對(duì)于懸浮細(xì)胞樣品：

離心收集細(xì)胞，用PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍.加入適量裂解液,用槍吹打把細(xì)胞吹散。用手指輕彈或旋渦震蕩5-10 min以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝然后再裂解。充分裂解后，10000-14000g離心10 min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)操作。

D. 對(duì)于組織樣品：

1) 手術(shù)切除的組織塊迅速置于預(yù)冷的生理鹽水中，漂洗數(shù)次，以清潔表面的血跡，將組織稱(chēng)量后切成幾個(gè)較小的組織塊放入組織勻漿器中。

2) 取適當(dāng)量的RIPA裂解液混勻，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的zui終濃度為1 mM。

3) 按組織凈重（g）：裂解液(ml)=1：10的比例，加入相應(yīng)體積的裂解液進(jìn)行勻漿(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,，如果需要高濃度的蛋白樣品, 可以適當(dāng)減少裂解液的用量) 。

4) 用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。

5) 充分裂解后,10000-14000g離心3- 5 min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)作。

5. 注意事項(xiàng)：

1) 抽提蛋白的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。建議將樣品分裝成合適的量，然后冷凍干燥或直接以液體狀態(tài)置-20℃中保存，不要反復(fù)凍融。

2) 需自備PMSF。建議在臨用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的zui終濃度為1mM。PMSF(WBR0114)可以向我公司訂購(gòu)。

3) RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物，屬正常現(xiàn)象。在不檢測(cè)和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；否則可以通過(guò)超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

4) 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

*本試劑僅供實(shí)驗(yàn)室研究使用

若有需求請(qǐng)?jiān)谠?xún)價(jià)詳細(xì)說(shuō)明里面標(biāo)注您的