BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒

1.產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

BCA(bicinchoninic acid)是理想的蛋白質(zhì)定量方法，是當(dāng)前比Lowry法更*的于檢測(cè)總蛋白質(zhì)含量的產(chǎn)品，測(cè)定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響。在組織細(xì)胞裂解實(shí)驗(yàn)中，常用濃度的去垢劑SDS，Triton X-100，Tween不影響檢測(cè)結(jié)果，但受螯合劑(EDTA，EGTA)、還原劑（DTT，巰基乙醇）和脂類的影響。實(shí)驗(yàn)中，若發(fā)現(xiàn)樣品稀釋液或裂解液本身背景值較高，可試用Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒。該產(chǎn)品不受此影響，因此與之配合使用，可免除您實(shí)驗(yàn)中的許多煩惱。

基本原理：堿性條件下，蛋白將Cu²⁺還原為Cu⁺， Cu⁺與BCA試劑形成紫顏色的絡(luò)合物，吸光度強(qiáng)度與蛋白濃度成正比。測(cè)定其在562 nm處的吸收值，并與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比，即可計(jì)算待測(cè)蛋白的濃度。

2.包裝清單：

3.保存條件：BCA試劑 A和B 在4℃保存，蛋白標(biāo)準(zhǔn)品在-20℃保存，本試劑盒自訂購(gòu)之日起一年內(nèi)有效。

4.使用說明：

A.試管法

1)  配制工作液: 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑A加1體積 BCA試劑B（50:1）配

2)  制適量BCA工作液，充分混勻。

3)  稀釋標(biāo)準(zhǔn)品：將標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)存液稀釋至25～2000 μg/ml。

5)  各管加入2 ml BCA工作液，37℃放置30 min。（增加孵育時(shí)間和溫度能夠增加562 nm的吸光度值和檢測(cè)zui低濃度，降低測(cè)量范圍）4)  將0.1 ml的標(biāo)準(zhǔn)品和樣本分別添加于測(cè)試管中。

6)  冷卻到室溫，（BCA不會(huì)達(dá)到真正的反應(yīng)終止點(diǎn)，當(dāng)冷卻到室溫時(shí)顏色依然會(huì)產(chǎn)生。但是在室溫下顏色產(chǎn)生的效率非常低，在冷卻后10 min內(nèi)測(cè)量完所有試管則無影響）用酶標(biāo)儀測(cè)定A562，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出蛋白濃度。

B．微孔板法

1)  配制工作液（同上）

2)  稀釋標(biāo)準(zhǔn)品（同上）

3)  將25 μl的標(biāo)準(zhǔn)品和合適濃度范圍的樣本分別添加于96孔板的微孔中。

4)  各孔加入200 μl BCA工作液，充分混勻。

5)  蓋上96孔板蓋，37℃孵育30 min。

6)  冷卻到室溫，用酶標(biāo)儀測(cè)定A562，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出蛋白濃度。

5.注意事項(xiàng)：

1)  在低溫條件或*保存出現(xiàn)沉淀時(shí)，可攪拌或37℃溫育或微波幾十秒使溶解, 如發(fā)現(xiàn)細(xì)菌污染則應(yīng)丟棄。

2)  樣品中若含有EDTA、EGTA、DTT、硫酸銨、脂類會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果，請(qǐng)?jiān)囉?/span>Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒；高濃度的去垢劑也影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可用TCA沉淀去除干擾物質(zhì)。

3)  要得到更為精確的蛋白濃度結(jié)果，每個(gè)蛋白梯度和樣品均需做復(fù)孔且標(biāo)準(zhǔn)品與樣品處理要盡量一樣（如采用同樣的溶液溶解樣品和標(biāo)準(zhǔn)品）, 每次均應(yīng)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

4)  當(dāng)試劑A和B混合時(shí)可能會(huì)有渾濁，但混勻后就會(huì)消失。

需準(zhǔn)備37℃水浴或溫箱、酶標(biāo)儀或普通分光光度計(jì)，測(cè)定波長(zhǎng)為540-595 nm之間，一般選562nm。酶標(biāo)儀需與96孔酶標(biāo)板配套使用。使用分光光度計(jì)測(cè)定蛋白濃度時(shí)，試劑盒測(cè)定的樣品數(shù)量會(huì)因此而減少。使用溫箱孵育時(shí)，應(yīng)注意防止因水分蒸發(fā)影響檢測(cè)結(jié)果。

*本試劑僅供實(shí)驗(yàn)室研究使用

若有需求請(qǐng)?jiān)谠儍r(jià)詳細(xì)說明里面標(biāo)注您的