神經肽Y放免藥盒操作說明書                                                                                               NPY（HY-098） RIA   KIT   神經肽Y（Neuropetide  NPY）是一種含有36個氨基酸殘基的多肽。廣泛分布于哺乳動物的中樞神經系統。NPY可收縮血管，升高血壓，對心臟表現為負性肌力作用。zui近有作者證實血小板有合成NPY的能力。NPY含量與應激反應程度有關，當出血性休克時，NPY釋放增加對維持全身血壓穩定和調節器官血流量具有重要的代償作用。研究各種病理狀態血漿及血小板NPY含量與釋放的改變及其病理生理意義，對心腦血管疾病的防治具有廣闊的研究前景。 測定盒組成：      1、緩沖液一瓶。            2、分離劑（第二抗體）一瓶。      3、NPY  抗體一瓶，用前加    ml緩沖液稀釋。      4、NPY標記一瓶，用前加     ml緩沖液稀釋。      5、NPY標準品五瓶：用前每瓶加   ml緩沖液稀釋33、100、300、600、1200pg/ml。    6、抑肽酶一瓶。      7、10%EDTA.Na2一瓶。 樣品收集：      1、取靜脈血3ml注入含10%EDTA.Na2  40ul和抑肽酶10ul（含100U/ml以上）的試管中，混勻4℃，3000轉/分 離心10分鐘，分離血漿（溶血樣品影響測定結果）。如需要可分裝2-3份保存，放-20℃可保存2個月，在-70℃以下可存放半年。 測定前，使樣本置于室溫或冷水中復融，再次4℃，3000轉/分 離心5分鐘，取上清測定。       2、組織樣品的處理：取出活組織，吸去血跡，稱重，放入0.2mol/L 1N HAC 1ml中，然后在100℃水浴中煮沸10分鐘，勻漿。4℃，3000轉/分 離心15分鐘，取上清放-20℃以下保存，測定時用PBS五倍以上稀釋，以調節PH值。另外，每種組織的樣品非特異結合（U0）可能有差異，每份標本zui單獨做一個U0。取組織的重量視不同組織而異。       3、血漿樣品處理：實驗結果發現：有少數患者可能由于使用某些藥物或個體差異，出現血漿蛋白對抗原抗體反應的影響，測定NPY值偏低，甚至為零。為排除樣品中蛋白質的干擾，可采用簡易酸性乙醇提取法，具體步驟如下：   取血漿0.5ml+1ml酸性無水乙醇（ 100ml無水乙醇+冰乙酸1.2ml），放振蕩器上振蕩1min，4℃，3500rpm/15min  離心15min，將上清液倒入青霉素瓶，在45℃水浴鍋上蒸干（可將水浴鍋溫度調到80℃左右，鍋口上放一鋁板，鋁板上溫度約40~45℃，將青霉素瓶置于鋁板之上），大約需24小時樣品可以*干燥，干燥后將青霉素瓶加蓋，封口，放-20℃保存。     測定前，每瓶加PH7.4 PBS 0.5ml溶解，混勻，倒入塑料管中，放-20℃ 4h以上至樣品*凍結，然后取出放置4℃*溶解，取上清200ul測定用。 注：從4℃取出后，一定要輕拿輕放，千萬不要再振蕩混勻，不要在室溫放置過久，現加現取。             測定方法：本實驗采用非平衡法，取聚苯乙烯編號，按下表操作。                          NPY ? RIA  操作程序（單位：ul）              ————————————————————————————                試   劑      T     NSB     S0     S1~S5    樣  品              ————————————————————————————                緩 沖 液    ——    300     200    ——     ——                標 準 品    ——    ——    ——    200     ——                樣    品    ——    ——    ——   ——      200                抗    體    ——    ——     100    100      100                  ————————————————————————————                             搖勻，4℃  48小時              ————————————————————————————                             125I-NPY      100      100     100    100      100                  ————————————————————————————                                搖勻，4℃  24小時              ————————————————————————————                分 離 劑    ——     500    500     500     500              ————————————————————————————       混勻，室溫放置20分鐘，4℃3500轉/分 離心25分鐘，去上清，測定沉淀cpm值。    結果計算：     以N/T、B/T計算NSB、S0結合百分率，以B/B0計算標準及待測物結合百分率， 在半對數座標紙上繪制標準曲線，并查出樣品值或由自動Υ-計數儀器直接讀出結果。                     注：測兔標本時，應改用20%PEG500ul/管 分離。同時向 NSB、S0、 S1~S5 管              加Υ球蛋白液100ul/管；U、U0管加緩沖液100ul/管。    本試劑盒主要技術參數：      特異性：抗血清與7種常見的多肽類化合物的交叉反應<1%。      靈敏度：<33pg/ml?？蓽y范圍：33~1200 pg/ml。      精密度：批內CVW<10%，批間CVb<15% 。         有效期：本藥盒4~8℃，保存有效期35天。        正常參考值：145.1±44.1 pg/ml。               本月藥盒參考數據：    —————————————————————————————————————————            T       NSB       S0            S1        S2           S3         S4         S5        —————————————————————————————————————————     CPM     —————————————————————————————————————————              N/T%          B0/T%        B/ B0 %       —————————————————————————————————————————